研究目的
为探究为何其他研究在使用CBQCA衍生化后未能检测到色氨酸（Trp），通过质谱法研究色氨酸的衍生化过程，比较衍生化后色氨酸与亮氨酸（Leu）的荧光强度，并在缓冲液中加入β-环糊精作为荧光产率的增强因子。
研究成果
研究表明，尽管色氨酸的荧光产率较低，但通过CBQCA衍生化和毛细管电泳/发光二极管诱导荧光检测（CE/LEDIF）仍可对其进行鉴定。添加环糊精（(cid:3)-CD）提高了色氨酸-CBQCA荧光检测的灵敏度。质谱分析中观察到的脱羧反应发生在质谱仪的离子源内，而非衍生化过程中。
研究不足
主要限制在于Trp-CBQCA衍生物的荧光产率较低，这使其鉴定具有挑战性。此外，标记氨基酸在质谱仪源中的脱羧反应使分析更为复杂。
1：实验设计与方法选择：
本研究通过毛细管电泳/发光二极管诱导荧光（CE/LEDIF）实验和质谱（MS）分析，探究色氨酸-CBQCA（Trp-CBQCA）与亮氨酸-CBQCA（Leu-CBQCA）的衍生化及荧光特性。
2：样本选择与数据来源：
在特定条件下，以CBQCA对色氨酸（Trp）和亮氨酸（Leu）样本进行衍生化处理。
3：实验设备与材料清单：
使用安捷伦科技CE7100仪器、Zetalif LED检测器及Micromass Qtof Ultima 2质谱仪?；约涟ㄅ鹚?、十二烷基硫酸钠（SDS）、γ-环糊精、β-环糊精、L-亮氨酸、DL-色氨酸、壬胺、氰化钾（KCN）及CBQCA。
4：实验流程与操作步骤：
在pH 9.9的硼酸盐缓冲液中完成衍生化，随后进行CE/LEDIF及MS分析。
5：9的硼酸盐缓冲液中完成衍生化，随后进行CE/LEDIF及MS分析。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：开展荧光与吸光度测定，并通过MS/MS光谱解析衍生化过程。
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Agilent Technologies CE7100
CE7100
Agilent Technologies
Capillary electrophoresis instrument used for separation and analysis of amino acids derivatized with CBQCA.
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Zetalif LED detector
Picometrics Technologies (now Adelis Technologies)
LED detector equipped with a 480 nm LEDs for fluorescence detection above 510 nm.
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Micromass Qtof Ultima 2 mass spectrometer
Qtof Ultima 2
Micromass
Mass spectrometer equipped with an ESI source for negative mode analysis of derivatized amino acids.
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Horiba Fluorolog 3-2 iHR 320 fluorimeter
Fluorolog 3-2 iHR 320
Horiba
Fluorimeter used for fluorescence measurements at 480 nm excitation wavelength.
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HP 8452A photodiode array
8452A
HP
Photodiode array used for ultraviolet-visible absorbance measurements.
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