研究目的
开发一种光漂白辅助的STORM方法，用于蓝细菌原绿球藻中FtsZ环的超分辨率成像，从而实现对蛋白质相互作用和亚细胞结构的高分辨率研究。
研究成果
光漂白辅助的STORM方法有效降低了原绿球藻的自发荧光，实现了横向分辨率约10纳米的超分辨成像。该方法可详细研究细胞周期中FtsZ环的形态，为细胞分裂过程提供见解。该方案或可适配其他光合生物。
研究不足
该方法需谨慎处理有毒化学品和高强度光照，存在一定危险性。光漂白步骤耗时较长，且可能无法完全消除所有细胞中的自发荧光。染料和荧光蛋白的选择受光合色素吸收光谱的限制。
1：样本制备与固定：
接种原绿球藻MED4菌株，用甲醛和戊二醛固定。
2：载玻片聚苯乙烯微球预包被：
作为漂移校正的基准标记物。
3：聚赖氨酸包被于微球载玻片：
用于蓝藻细胞固定。
4：细胞载玻片固定：
将固定后的细胞附着于载玻片。
5：蓝藻细胞透化处理：
使用溶菌酶和去污剂进行透化。
6：阻断步骤中叶绿素光漂白：
通过高强度光照降低自发荧光。
7：抗体结合：
用抗FtsZ抗体及Alexa Fluor 750偶联二抗进行免疫染色。
8：STORM成像缓冲液制备：
成像前新鲜配制。
9：STORM数据图像采集：
使用STORM软件采集图像并进行漂移校正。
10：原始数据超分辨率图像重建：
通过ImageJ中的QuickPALM和3D Viewer插件重建。
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Alexa Fluor 750
Fluorophore conjugated to secondary antibody for STORM imaging
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polystyrene beads
Fiducial markers for drift correction in STORM imaging
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poly-L-lysine
For immobilization of cyanobacterial cells on coverslips
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QuickPALM
Plugin in ImageJ for reconstructing super-resolution images
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3D Viewer
Plugin in ImageJ for generating 3-D images
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