研究目的
描述如何逐步构建并表征基于棱镜的全内反射荧光（pTIRF）显微镜，用于体外单分子成像、纳米结构分析及其他生命科学研究。
研究成果
该论文提供了构建和表征pTIRF显微镜的详细指南，展示了其在单分子成像和纳米结构分析中的成功应用。该仪器适用于揭示生物分子的动态、动力学及其他与结构/构象相关的信息。
研究不足
定制的pTIRF显微镜在选择和操作精密仪器部件方面需要高度专业技能。流动池设计中管道的物理阻碍限制了实验的可用空间。
1：实验设计与方法选择：
该方法涉及使用市售部件组装pTIRF显微镜，重点包括激发光路、聚焦与光束定位以及发射光路。
2：样本选择与数据来源：
研究采用生物分子、纳米结构和细胞进行单分子分析。
3：实验设备与材料清单：
包括激光器、光学元件、倒置显微镜及电子倍增电荷耦合器件（EMCCD）相机。
4：实验流程与操作步骤：
详细说明显微镜组装、激光校准及执行代表性pTIRF实验的步骤。
5：数据分析方法：
使用MATLAB脚本和OriginPro进行数据采集与分析。
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Clean-up filter
zet640/20x
Chroma Technology Corp
Removes errant light created as a byproduct of laser generation.
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Dichroic mirror
t565spxxr-uf3
Chroma Technology Corp
Combines two laser paths by transmitting green and reflecting red wavelengths.
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Diode Laser
639 nm Coherent CUBE
Coherent Inc.
Excitation light source for fluorophores.
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UV FS Pellin-Broca Prism
11 × 20 × 6.4 mm
Altos Photonics, Inc.
Directs the incoming laser beam to the quartz/water TIRF interface for total internal reflection.
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Immersion Oil
Type FF
Cargille
Used between the prism and the quartz slide for refractive index matching.
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EMCCD Camera
DU-897U-CS0-#BV
Olympus America Inc.
Records fluorescence signal for single molecule analysis.
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Optosplit-II
OptoSplit II LS–1.0x
Cairn Research
Separates incoming fluorescence emission into two beams for parallel imaging.
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Vibration Isolation Table
M-ST-UT2-46-8
Newport Corporation
Provides a stable platform for the microscope setup.
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