研究目的
利用胞苷类似物作为荧光标记物研究新霉素与其RNA适配体的结合动力学及机制。
研究成果
研究表明，C·m f是RNA动态变化的敏感探针，可用于研究新霉素与其适配体的结合机制。研究确定了该两步结合机制，其中构象选择起主导作用。
研究不足
该研究的局限性在于所使用的特定RNA序列和条件，以及荧光标记对RNA结构和动态的潜在影响。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用稳态和时间分辨荧光光谱技术评估Cm f在RNA中的光物理性质，并探究新霉素与其适配体的结合情况。
2：样本选择与数据来源：
合成了RNA模型序列及新霉素适配体，并在特定位置标记Cm f。
3：实验设备与材料清单：
仪器包括用于吸收光谱的JASCO V-650分光光度计、用于发射光谱的JASCO FP 8500荧光分光光度计，以及用于结合动力学研究的停流装置。
4：实验流程与操作步骤：
测量前对样本进行退火处理。通过热变性实验评估Cm f对双链稳定性的影响。
5：数据分析方法：
使用时间相关单光子计数装置测量荧光寿命，结合动力学数据通过DynaFit软件分析。
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JASCO V-650 spectrometer
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JASCO
Recording steady-state absorption spectra
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JASCO FP 8500 fluorescence spectrometer
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JASCO
Recording emission spectra and absolute fluorescence quantum yield determinations
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SFM-20
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Mixing experiments for fluorescence stopped-flow measurements
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