研究目的
建立一种快速、灵敏的紫外-可见分光光度法测定血浆中PEG-ASNase活性,用于监测血浆中PEG-ASNase活性并设计个体化方案。
研究成果
奈斯勒法经过充分验证,可成功应用于临床环境中急性淋巴细胞白血病(ALL)患者血浆样本的检测。该方法将个性化纳米医学提升到了一个全新的水平。
研究不足
该研究未提及任何具体局限性。
1:实验设计与方法选择
本研究采用奈斯勒试剂作为氨的显色剂,通过生成稳定的黄色络合物来测定血浆中PEG-天冬酰胺酶活性。
2:样本选择与数据来源
血浆样本采集自南京医科大学附属儿童医院,保存于-20°C环境。
3:实验设备与材料清单
硫酸铵、天冬酰胺、三氯乙酸(TCA)、氢氧化钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠购自南京化学试剂有限公司(分析纯);PEG-天冬酰胺酶(3,750 IU,5 mL)采购自江苏恒瑞医药股份有限公司;碘化汞(纯度99.9%,19270)和碘化钾(AR级)由西娅试剂提供。
4:实验流程与操作步骤
底物溶液由0.6630克L-天冬酰胺溶解于100毫升磷酸盐缓冲液(用0.2 M磷酸氢二钠调节pH至8.0)配制而成。通过奈斯勒试剂反应后光度法检测氨释放量测定酶活性。
5:数据分析方法
酶活性单位定义为37°C条件下每分钟释放的氨微摩尔数,氨浓度可通过特定计算转换为酶活性值。
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Agilent 8453 scanning UV–vis spectrophotometer
8453
Agilent Technologies
Recording the UV–vis scanning spectra between 200 and 600 nm of the sample solutions and the blank solution.
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BSA124S electronic balance
BSA124S
Sartorius Scientific Instruments (Beijing) Co., Limited
Weighing materials for the preparation of Nessler’s reagent.
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752 ultraviolet–visible Spectrophotometer
752
Shanghai Jinghua Technology Instrument Co., Ltd
Measuring the optical density (OD) at 450 nm.
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PHS-3C Ph meter
PHS-3C
Shanghai INESA Analytical Instrument Co., Ltd
Adjusting the pH of the phosphate buffer solution.
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HH-2 Intelligent digital thermostat water bath
HH-2
Nan Jing Keer Equipment PTY., Ltd
Keeping the substrate solution warm at 37°C.
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KDC-140HR high-speed refrigerated centrifuge
KDC-140HR
Anhui Zhongke Intelligent Hi-Tech Co., Ltd
Centrifuging the sample for deproteination.
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