研究目的
利用荧光显微镜和荧光共聚焦显微镜研究凝固区（CZ）厚度对局部涂抹的亲水性和亲脂性测试分子皮肤荧光强度（FI）的影响，并比较这些分子的FI差异。
研究成果
凝血区厚度对亲水性和亲脂性分子皮肤荧光强度的影响不同：亲水性NAF在薄凝血区呈现最高强度，而亲脂性CAF在无凝血区或薄凝血区强度最高。这表明存在依赖凝血区的药物摄取机制，可能为不同药物类型优化激光辅助给药提供依据。
研究不足
该研究在体外进行，仅采用一个时间点（4小时），且流式细胞术检测深度有限（最深90微米）和视野范围受限。测试分子的理化特性及向临床环境的转化仍需进一步研究。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用离体设计，使用猪皮样本通过微针或剥脱性点阵激光（AFL）制备不同角质层厚度（0、20、80微米）的微通道。荧光显微镜（FM）和荧光共聚焦显微镜（FCM）用于量化孵育4小时后荧光素钠（NAF，亲水性）与羧基荧光素（CAF，亲脂性）的荧光强度（FI）。
2：80微米）的微通道。荧光显微镜（FM）和荧光共聚焦显微镜（FCM）用于量化孵育4小时后荧光素钠（NAF，亲水性）与羧基荧光素（CAF，亲脂性）的荧光强度（FI）。 样本选择与数据来源：
2. 样本选择与数据来源：皮肤样本取自七头丹麦长白/约克夏杂交猪的侧腹部位，-80°C保存后使用前解冻。测试区域为1×1厘米。
3：实验设备与材料清单：
设备包括微针（540滚轮）、AFL系统（Ultrapulse，DeepFX手柄，Lumenis公司）、荧光显微镜（奥林巴斯IX70）、CCD相机（ORCA-R2，滨松光电）、共聚焦显微镜（Vivascope 1500，Mavig）、红外测温仪（RS-1327）及软件（ImageJ、SPSS、Prism GraphPad）。材料包含荧光素钠、羧基荧光素（Sigma-Aldrich）、水醇凝胶（LEO制药）及生理盐水。
4：0）、CCD相机（ORCA-R2，滨松光电）、共聚焦显微镜（Vivascope 1500，Mavig）、红外测温仪（RS-1327）及软件（ImageJ、SPSS、Prism GraphPad）。材料包含荧光素钠、羧基荧光素（Sigma-Aldrich）、水醇凝胶（LEO制药）及生理盐水。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：按指定角质层厚度及深度制备微通道，局部涂抹测试分子并孵育4小时。制备不同深度的皮肤切片进行FM成像及共聚焦扫描，测量角质层区与周围皮肤的感兴趣区域（ROI）荧光强度，必要时扣除自发荧光。
5：数据分析方法：
采用非参数统计（Mann-Whitney检验与Wilcoxon检验）并实施Bonferroni校正，数据通过SPSS分析、Prism GraphPad绘图。
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CCD camera
ORCA-R2
Hamamatsu Corp.
Capture high-resolution images for fluorescence microscopy.
-
carboxyfluorescein
5(6)-carboxyfluorescein
Sigma-Aldrich
Lipophilic test molecule for fluorescence imaging to compare with sodium fluorescein.
-
microneedle
540 derma roller
Denmark
Generate microchannels with no coagulation zone (CZ-0 mm) in skin samples.
-
ablative fractional laser
Ultrapulse, DeepFX handpiece
Lumenis Inc.
Generate microchannels with coagulation zones of specified thicknesses (CZ-20 mm and CZ-80 mm) in skin samples.
-
fluorescence microscope
Olympus IX70
Olympus Denmark A/S
Acquire fluorescence and light microscopy images of skin sections at various depths.
-
confocal microscope
Vivascope 1500 multi laser
Mavig
Perform reflectance and fluorescence confocal microscopy imaging of skin samples.
-
infrared thermometer
RS-1327
Taiwan
Measure skin surface temperature to ensure consistency during experiments.
-
sodium fluorescein
Sigma-Aldrich
Hydrophilic test molecule for fluorescence imaging to study drug uptake.
-
gel
hydro alcoholic gel no. 130-345-06-01P
LEO Pharma
Vehicle for diluting and applying test molecules to skin samples.
-
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