研究目的
为寻找一种对CD105具有高亲和力的新型非抗体结合肽（nABP296），用于肿瘤成像和诊断，特别是骨肉瘤的诊断。
研究成果
nABP296是一种新型肽段，能特异性结合CD105，实现骨肉瘤在体内外的高效成像。该肽段在诊断、间充质干细胞分离及靶向治疗方面具有潜力，且未观察到细胞毒性。
研究不足
nABP296穿透效应的潜在机制尚不明确，需进一步研究。该研究聚焦于特定细胞系和模型，其结论对其他癌症或人体内应用的普适性可能有限。
1：实验设计与方法选择：
采用M13噬菌体生物淘选法筛选结合CD105的肽段，通过ELISA、流式细胞术、免疫荧光及活体成像验证其结合亲和力与特异性。
2：样本选择与数据来源：
使用MNNG/HOS（CD105阳性）和Cal27（CD105阴性）细胞系、重组人CD105蛋白、小鼠异种移植肿瘤模型及人骨肉瘤与舌癌组织切片。
3：实验设备与材料清单：
包括M13噬菌体展示文库、MaxiSorp培养板、流式细胞仪、共聚焦激光扫描显微镜、IVIS Spectrum活体成像系统及相关抗体与试剂。
4：实验流程与操作步骤：
涵盖生物淘选、肽段合成、细胞培养、RT-PCR、免疫荧光、流式细胞术、ELISA、细胞毒性检测、活体成像及组织学染色。
5：数据分析方法：
使用GraphPad Prism软件进行统计分析，细胞毒性数据采用单因素方差分析（ANOVA）。
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Confocal laser scanning microscopy
CLSM
Leica Microsystems GmbH
Used for immunofluorescence imaging to visualize peptide and antibody binding.
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IVIS Spectrum In Vivo Imaging system
IVIS Spectrum
PerkinElmer, Inc.
Used for in vivo imaging to detect fluorescence from labelled peptides in tumour-bearing mice.
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VICTOR X5 Multilabel plate reader
VICTOR X5
PerkinElmer, Inc.
Used for measuring absorbance in ELISA and cytotoxicity assays.
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Ph.D.-12 Phage Display Peptide Library
Ph.D.-12
New England Biolabs, Inc.
Used for biopanning to identify peptides binding to CD105.
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MaxiSorp plates
MaxiSorp
Thermo Fisher Scientific, Inc.
Used for coating proteins in ELISA and biopanning experiments.
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FACSCalibur flow cytometer
FACSCalibur
BD Biosciences
Used for flow cytometry analysis to measure CD105 expression and peptide binding.
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NanoDrop 1000
NanoDrop 1000
Thermo Fisher Scientific, Inc.
Used for spectrophotometry to measure RNA concentration.
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Cell Counting Kit-8
CCK-8
Dojindo Molecular Technologies, Inc.
Used for cytotoxicity assays to measure cell viability.
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Microm HM560 cryostat microtome
Microm HM560
Thermo Fisher Scientific, Inc.
Used for sectioning tumour tissues for histological analysis.
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