研究目的
展示一种用于迁移T细胞活细胞成像的方案，以了解其导航和运动能力，从而提供新的治疗机会。
研究成果
该协议为T细胞迁移的实时成像提供了一种可重复的方法，能够研究速度和方向等动态行为。该方法可适用于研究细胞内信号传导事件，在治疗开发中具有潜在应用价值。
研究不足
活细胞成像面临诸多挑战：激光照射可能导致细胞损伤、需维持恒定的环境条件，以及T细胞具有非贴壁特性。染料的细胞毒性和光漂白会影响实验结果，且必须优化成像参数以尽量减少损伤。
1：实验设计与方法选择：
该方案采用自动化显微镜进行活细胞成像，实时追踪T细胞迁移，包括培养板包被、细胞激活、染色和成像等步骤。
2：样本选择与数据来源：
使用从血液样本中分离的人原代T细胞。
3：实验设备与材料清单：
包括RPMI1640培养基、T细胞、PBS、包被试剂、LFA-1激活缓冲液、96孔玻璃底培养板、诺考达唑等药物、染色染料（CellMask?、Hoechst 33342）、自动化显微镜（IN CELL Analyzer 2200）及图像分析软件（Imaris v9.0）。
4：2）、自动化显微镜（IN CELL Analyzer 2200）及图像分析软件（Imaris v0）。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：包括用rICAM-1包被培养板、T细胞激活与染色、特定显微镜参数下的活细胞成像，以及采用追踪算法的图像分析。
5：数据分析方法：
使用Imaris软件进行图像分析，追踪细胞并绘制迁移参数（如速度、位移和持续性）。
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获取完整内容-
IN CELL Analyzer 2200
2200
GE Healthcare
Automated microscope used for live cell imaging with environmental control, capable of high-speed acquisition and multiple channels for fluorescence imaging.
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Imaris
v9.0
Bitplane AG
Image analysis software for tracking cells and analyzing migration parameters such as speed, displacement, and persistence.
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CellMask
Staining dye used to visualize cells in live cell imaging.
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Hoechst 33342
Staining dye used to stain nuclei in live cell imaging.
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96-well glass bottom tissue culture plates
flat bottom
Assay plates used for cell culture and imaging, with glass bottom to minimize ocular discrepancy.
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