研究目的
设计一种用于检测尿液样本中溶菌酶的荧光探针,以避免背景荧光并提高稳定性。
研究成果
DCPOP是一种用于尿液中溶菌酶检测的高效荧光传感器,其近红外发射可避免背景荧光干扰,稳定性良好,经优化后灵敏度可达5微克/毫升,展现出临床诊断应用潜力。
研究不足
尿液样本中传感器的灵敏度需要通过增加探针浓度来优化;虽注意到其他蛋白质可能存在干扰,但选择性良好。
1:实验设计与方法选择:
本研究设计了一种含三苯基磷酸酯封端的DCPO基荧光传感器(DCPOP),以增强稳定性并实现溶菌酶检测。方法包括合成、光物理表征及传感实验。
2:样本选择与数据来源:
以溶菌酶及其他蛋白质(葡萄糖氧化酶、牛血清白蛋白、角蛋白、血红蛋白)作为分析物。采集真实尿液样本并添加溶菌酶进行测试。
3:实验设备与材料清单:
仪器包括LCMS-IT-TOF质谱仪、布鲁克Advance II核磁共振仪、FS-5分光光度计、Cary-300分光光度计、马尔文Nano-S90动态光散射仪。材料包含DCPO、二苯基氯磷酸酯、DMSO等溶剂及PBS、HEPES缓冲液。
4:实验流程与操作步骤:
通过化学反应合成DCPO和DCPOP,经柱层析纯化。在不同溶剂及水混合体系中开展光物理测试。进行溶菌酶滴定实验、其他蛋白质选择性测试、不同pH及缓冲液条件下的稳定性测试,以及尿液真实样本分析。
5:数据分析方法:
采用荧光与吸收光谱分析、动态光散射测定粒径、核磁共振确认结构、高分辨质谱测定分子量,并通过线性回归计算灵敏度。
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