研究目的
开发一种具有聚集诱导发光特性的小分子荧光团,用于胚胎细胞示踪,以克服传统示踪剂(如HRP和荧光团-葡聚糖偶联物)存在的扩散、信号衰减及抗原性等问题。
研究成果
TPEPy-TEG是一种有效的小分子聚集诱导发光团,可用于胚胎细胞示踪,能提供明亮稳定的信号且无扩散问题。它克服了传统示踪剂的局限性,在发育生物学的谱系示踪应用中展现出良好前景。
研究不足
该研究仅限于体外和斑马鱼模型,未证明其对其他生物体或哺乳动物体内系统的适用性。探针(如TPEPy-TEG-Ac)的合成与修饰增加了复杂性,且其在高等生物中的长期效应尚不明确。
1:实验设计与方法选择:
设计并合成了聚集诱导发光材料TPEPy-TEG用于谱系追踪。以斑马鱼胚胎为模型系统。方法包括合成、光物理表征、体外细胞研究和斑马鱼细胞显微注射。
2:样本选择与数据来源:
使用3T3细胞、HeLa细胞、HEK-293细胞及斑马鱼胚胎(野生型和转基因Tg(cldnB:lynEGFP))。样本基于细胞追踪研究的标准生物模型选取。
3:实验设备与材料清单:
共聚焦显微镜(卡尔蔡司LSM 800)、荧光立体显微镜、高效液相色谱仪、动态光散射粒径测量仪、显微注射系统(哈佛仪器氮气注射器)、玻璃毛细管针头、合成用各类化学品(如化合物1-4、碘甲烷、六氟磷酸银)。
4:0)、荧光立体显微镜、高效液相色谱仪、动态光散射粒径测量仪、显微注射系统(哈佛仪器氮气注射器)、玻璃毛细管针头、合成用各类化学品(如化合物1-碘甲烷、六氟磷酸银)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:通过Heck偶联等反应合成TPEPy-TEG,表征其光物理性质,研究其与生物分子及细胞的相互作用。在不同发育阶段(如单细胞期、四细胞期、六十四细胞期)对斑马鱼胚胎进行显微注射,采用共聚焦和荧光显微镜随时间成像追踪细胞分裂与命运。
5:数据分析方法:
使用ImageJ进行图像分析,HPLC进行化学分析,统计方法处理活力检测数据(如MTT法评估生物相容性)。
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获取完整内容-
Confocal Microscope
LSM 800
Carl Zeiss
Used for imaging zebrafish embryos and cells to detect fluorescence signals from TPEPy-TEG and GFP.
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Micro-injection System
Harvard Apparatus
Used for intracellular delivery of TPEPy-TEG into zebrafish embryos via glass capillary needles.
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Glass Capillary Needle
Used for micro-injection into cells, pulled to fine needles for precise delivery.
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High-Performance Liquid Chromatography
HPLC
Used for chemical analysis to verify hydrolysis of TPEPy-TEG-Ac to TPEPy-TEG.
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Dynamic Light Scattering
Used to measure hydrodynamic size of nanoparticles like TPEPy and TPEPy-TEG in PBS.
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