研究目的
评估各类生物标志物用于结直肠癌腹膜转移肿瘤靶向荧光成像的适用性。
研究成果
上皮细胞黏附分子（EpCAM）和癌胚抗原（CEA）在结直肠癌腹膜转移中高度表达，使其成为术中荧光成像的理想靶点。这有助于提高肿瘤细胞减灭术中的诊断与治疗水平。
研究不足
生物标志物的选择基于荧光成像剂的可及性，样本量相对较小，未对相邻正常结肠组织进行免疫组化染色，且回顾性研究性质限制了对肿瘤异质性的评估。
1：实验设计与方法选择：
该研究采用免疫组化（IHC）染色评估结直肠癌及腹膜转移患者组织样本中的生物标志物表达，参考TASC评分系统进行靶点筛选。
2：样本选择与数据来源：
获取2014年3月至2015年9月期间在鹿特丹伊拉斯姆斯医学中心及基层医疗机构接受细胞减灭术和腹腔热灌注化疗患者的甲醛固定石蜡包埋组织块（来自病理档案库）。
3：实验设备与材料清单：
包括StarFrost粘附载玻片、EnVision FLEX抗原修复液、PT Link（Dako）、超快速扫描仪（Philips）、抗体（如抗CEACAM5、抗cMet、抗EpCAM、抗FRα）及试剂（二甲苯、乙醇、H2O2、磷酸盐缓冲液、3,3′-二氨基联苯胺、苏木精、Pertex）。
4：抗cMet、抗EpCAM、抗FRα）及试剂（二甲苯、乙醇、H2O磷酸盐缓冲液、3,3′-二氨基联苯胺、苏木精、Pertex）。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：切片厚度4μm，经脱蜡、水化、过氧化物酶阻断、抗原修复后，一抗孵育过夜，洗涤后加二抗，DAB显色，复染，脱水，封片并扫描。同时进行苏木精-伊红染色。
5：数据分析方法：
生物标志物表达强度按0-3+分级，百分比按四分位数统计，综合为表达评分（0-12）。使用SPSS和GraphPad Prism软件计算Spearman相关系数进行统计分析。
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StarFrost adhesive slides
Used for collecting tissue sections in immunohistochemistry.
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EnVision FLEX Target Retrieval Solution
Low pH
Dako
Used for antigen retrieval in immunohistochemistry.
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PT Link
Dako
Equipment for antigen retrieval.
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Ultra Fast Scanner
Philips
Used for scanning immunohistochemistry slides.
-
monoclonal mouse anti-CEACAM5
Clone CI-P83-1
Santa Cruz
Primary antibody for immunohistochemical staining of CEA.
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polyclonal rabbit anti-cMet
sc-10
Santa Cruz
Primary antibody for immunohistochemical staining of C-Met.
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monoclonal anti-EpCAM
clone MOC31
Acris Antibodies
Primary antibody for immunohistochemical staining of EpCAM.
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monoclonal mouse anti-FRα
clone 26B3.F2
Biocare Medical
Primary antibody for immunohistochemical staining of FRα.
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IHC Assay Kit
4006 K
Biocare Medical
Kit used for folate receptor α staining.
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EnVision anti-mouse-HRP
Dako
Secondary antibody for immunohistochemistry.
-
EnVision anti-rabbit-HRP
Dako
Secondary antibody for immunohistochemistry.
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SPSS
version 23
IBM
Software for statistical analysis.
-
GraphPad Prism
6
GraphPad Software Inc.
Software for statistical analysis and graphing.
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