1：实验设计与方法选择：

采用基于导管的3D光学相干断层扫描（OCT）技术进行纵向观察研究，以24小时间隔监测机械通气患者气管插管内的生物膜形成情况直至拔管。通过分析光学散射特性，利用衰减系数区分生物膜与黏液。

2：样本选择与数据来源：

选取Carle基金会医院ICU中6例需机械通气超过24小时的危重症插管患者，经监护人签署知情同意书后纳入研究。

3：实验设备与材料清单：

商用导管式OCT系统（型号C7XR，圣犹达医疗公司）、OCT导管（Dragonfly型号C7，圣犹达医疗公司）、固定液（0.1M Na-Cacodylate缓冲液中含2.0%多聚甲醛和2.5%戊二醛）、消毒液（Revital-Ox Resert 4455-AW）、荧光染料（FilmTracer FM 1-43和SYPRO Ruby，英杰公司）、扫描电子显微镜（FEG 450，FEI Quanta）、荧光显微镜（Axiovert 200，蔡司）。

4：1M Na-Cacodylate缓冲液中含0%多聚甲醛和5%戊二醛）、消毒液（Revital-Ox Resert 4455-AW）、荧光染料（FilmTracer FM 1-43和SYPRO Ruby，英杰公司）、扫描电子显微镜（FEG 450，FEI Quanta）、荧光显微镜（Axiovert 200，蔡司）。 实验流程与操作规范：

4. 实验流程与操作规范：经吸引端口将无菌OCT导管插入气管插管内，沿5.4cm回撤距离进行径向3D OCT成像。每24小时采集图像直至拔管。拔管后对气管插管进行固定处理，开展革兰染色、荧光染色及扫描电镜成像。数据分析包括像素级衰减系数计算及采用Welch t检验进行统计比较。

5：4cm回撤距离进行径向3D OCT成像。每24小时采集图像直至拔管。拔管后对气管插管进行固定处理，开展革兰染色、荧光染色及扫描电镜成像。数据分析包括像素级衰减系数计算及采用Welch t检验进行统计比较。 数据分析方法：

5. 数据分析方法：基于自定义算法从OCT强度图像中提取衰减系数。通过MATLAB软件根据相对衰减系数（RAC）值对生物膜阳性组与阴性组进行统计学分析。