研究目的
构建一种灵敏且简单的荧光适配体传感器，采用核酸外切酶III辅助的信号放大策略检测牛奶样品中的黄曲霉毒素M1（AFM1）。
研究成果
该适配体传感器为牛奶中AFM1的检测提供了一种高灵敏度、高选择性和简便的方法，其检测限低至9.73纳克/千克，符合监管标准。与传统方法相比，它具有成本更低和操作更快的优势，并且通过调整适配体系统显示出检测更广泛分析物的潜力。
研究不足
该传感器在牛奶之外的复杂基质中可能存在局限性，可能受到未测试的其他物质的干扰，并且依赖于特定酶和DNA序列，这可能影响重现性。优化是在特定条件下完成的，实际应用可能需要进一步验证。
1：实验设计与方法选择：
该适配体传感器采用双系统设计——磁纳米珠上的AFM1诱导链释放与Exo III辅助的信号放大循环。通过DNA杂交、酶切反应及NMM染料介导的G-四链体形成实现荧光增强。
2：样本选择与数据来源：
商业采购全脂奶、脱脂奶、果汁奶样本并添加AFM1标准品。预测试阴性对照奶样确保无AFM1污染。
3：实验设备与材料清单：
包含磁纳米珠、DNA链、酶（Exo III）、荧光染料（NMM）、缓冲液（Tris-HCl、MgCl?、KCl）及真菌毒素标准品。专用设备：NanoDrop测DNA浓度、金属浴控温、Cary Eclipse荧光分光光度计检测信号。
4：实验流程与操作步骤：
组装过程包括生物素化适配体固定于链霉亲和素包被磁珠、互补DNA杂交、AFM1孵育释放C链、磁分离、加入G/T双链与Exo III扩增、NMM孵育及荧光测定。优化NMM浓度、反应时间等参数。
5：数据分析方法：
记录荧光强度并通过校准曲线分析。统计分析含回收率计算及与ELISA试剂盒结果对比。
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获取完整内容-
magnetic nanobeads
500 nm
Ocean Nanotech
Serve as a nanocarrier for aptamers, provide large surface area for DNA loading, enable easy magnetic separation to remove uncaptured strands and improve assay stability.
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NanoDrop
Thermo-Fisher Scientific
Used to redefine the concentration of DNA strands and aptamers.
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metal bath
Thermo-Fisher Scientific
Control the temperature of the recycle amplification process.
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Cary Eclipse fluorescence spectrophotometer
Agilent Technologies
Record fluorescence intensities at 612 nm for signal detection.
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ELISA kit
Sangon Biotech Co., Ltd.
Used for verification of the aptasensor performance by comparing results.
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Millipore water system
Millipore
Prepare Milli-Q water for experiments.
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Exonuclease III
Genesearch Pty Ltd.
Act as an amplifying biocatalyst to digest duplex DNAs and facilitate signal amplification.
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N-methyl mesoporphyrin IX
NMM
Frontier Scientific
Fluorescent dye that binds to G-quadruplex structures to generate amplified fluorescence signals.
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