研究目的
通过在人黑色素瘤细胞培养物和具有临床意义的BrafCA; Tyr-CreERT2; Ptenf/f小鼠模型（该模型在疾病进展、遗传学和组织病理学方面与人类黑色素瘤相似）中测试维替泊芬，以确定其是否具有临床潜力。
研究成果
维替泊芬可诱导YAP/TAZ降解并抑制黑色素瘤细胞培养物中的细胞生长，但在转基因小鼠模型中以临床相关剂量使用时既不能抑制肿瘤发生也不能阻止肿瘤进展，表明其作为黑色素瘤治疗药物的潜力有限。
研究不足
该研究采用转基因小鼠模型，可能无法完全复现人类黑色素瘤的复杂性；维替泊芬给药剂量基于人体安全剂量，对小鼠而言可能并非最佳疗效剂量；全身给药方式可能无法有效靶向肿瘤；维替泊芬治疗与siRNA敲除在细胞反应上的差异提示可能存在脱靶效应。
1：实验设计与方法选择：
本研究旨在通过体外细胞培养实验和体内转基因小鼠模型评估维替泊芬治疗黑色素瘤的潜力。方法包括蛋白质印迹法、细胞生长曲线测定、siRNA敲低、划痕实验、细胞形态分析以及小鼠维替泊芬给药处理。
2：样本选择与数据来源：
人黑色素瘤细胞系（A375、LOX IMVI、A375-P、A375-M、mel-537、mel-624、SKMEL5、SKMEL23、SKMEL28）购自ATCC和芝加哥大学综合癌症中心核心设施。体内研究使用BrafCA; Tyr-CreERT2; Ptenf/f小鼠模型。
3：LOX IMVI、A375-P、A375-M、mel-mel-SKMELSKMELSKMEL28）购自ATCC和芝加哥大学综合癌症中心核心设施。体内研究使用BrafCA; Tyr-CreERT2; Ptenf/f小鼠模型。 实验设备与材料清单：
3. 实验设备与材料清单：设备包括成像显微镜、蛋白质印迹装置、用于药物动力学分析的荧光光谱仪及肿瘤测量卡尺。材料包含维替泊芬（Sigma-Aldrich）、DMSO、siRNA（赛默飞世尔）、抗体（细胞信号技术公司）及各类缓冲液与试剂。
4：实验流程与操作规范：
培养细胞并给予维替泊芬或对照处理；通过蛋白质印迹分析蛋白水平；评估细胞生长、迁移及形态变化；小鼠经他莫昔芬诱导后腹腔注射维替泊芬；测量肿瘤并分析YAP/TAZ表达。
5：数据分析方法：
采用Student t检验和卡方检验（置信区间95%）进行数据分析；ImageJ软件用于密度测定；细胞计数与测量均设置三重重复。
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获取完整内容-
siRNA
S20366-YAP1, S24787-WWTR1, 4390844-siScramble
Thermo Fisher
Used for knocking down YAP and TAZ expression in cells.
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Verteporfin
Sigma-Aldrich
Used as a therapeutic compound to inhibit YAP/TAZ-TEAD interaction in melanoma cells.
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YAP/TAZ antibody
Cell Signaling
Used in Western blot analysis to detect YAP and TAZ protein levels.
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GAPDH antibody
Cell Signaling
Used as a loading control in Western blot analysis.
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goat anti-rabbit IgG-HRP
Santa Cruz
Secondary antibody used in Western blot development.
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Clarity Western ECL substrate
Bio-Rad
Used for developing Western blots.
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Lipofectamine 3000
Thermo Fisher
Used for siRNA transfection into cells.
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Adobe Photoshop CS6
CS6
Adobe
Used for measuring cell migration and morphology in scratch assays and cell length analysis.
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ImageJ
version 1.47
National Institutes of Health
Used for densitometric analysis of immunofluorescence images.
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DyLight 594 Anti-Rabbit IgG
Vector Labs
Secondary antibody used in immunohistochemistry for detecting YAP/TAZ.
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Vectashield Anti-fade Mounting Medium with DAPI
Vectashield
Used for mounting tissue sections in immunohistochemistry.
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