1：实验设计与方法选择：

本研究采用单分子荧光显微镜技术（具体为全内反射荧光显微镜TIRF）量化光物理特性。通过DNA支架将荧光团及其偶联物固定在链霉亲和素功能化的盖玻片上，使用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶组成的酶促除氧系统维持无氧环境。

2：样本选择与数据来源：

样本包含荧光团ATTO647N、Alexa555、Cy5及其光稳定剂偶联物（如NPA-ATTO647N、NPA-Alexa555、NPA-Cy5、Cy5-COT），并制备了含色氨酸残基的DNA偶联物。数据采集自TIRF图像中的单分子发射体。

3：7N、AlexaCy5及其光稳定剂偶联物（如NPA-ATTO647N、NPA-AlexaNPA-CyCy5-COT），并制备了含色氨酸残基的DNA偶联物。数据采集自TIRF图像中的单分子发射体。 实验设备与材料清单：

3. 实验设备与材料清单：设备包括倒置显微镜（Olympus IX-71和IX-83）、背照式电子倍增电荷耦合器件相机（C9100-13，滨松）及共聚焦显微镜；材料包含链霉亲和素、BSA、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、Trolox（TX）、环辛四烯（COT）、三(2-羧乙基)膦（TCEP）、巯基乙胺（MEA）及多种合成的DNA-荧光团偶联物。

4：3）、背照式电子倍增电荷耦合器件相机（C9100-13，滨松）及共聚焦显微镜；材料包含链霉亲和素、BSA、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、Trolox（TX）、环辛四烯（COT）、三(2-羧乙基)膦（TCEP）、巯基乙胺（MEA）及多种合成的DNA-荧光团偶联物。 实验流程与操作步骤：

4. 实验流程与操作步骤：通过生物素-链霉亲和素相互作用固定荧光团，在有无光稳定剂（如2 mM TX或COT）的无氧条件下进行TIRF成像。分析荧光瞬态以提取光漂白寿命、计数率及信噪比等参数，利用紫外光激活开展光开关研究。

5：数据分析方法：

采用定制软件识别光漂白步骤、计算光物理参数并进行自相关分析。校准光子计数并计算超分辨率应用中的定位误差。