研究目的
研究NRF2在Sig1R介导的视网膜光感受器?;ぶ械淖饔茫ㄌ迥谟胩逋猓氐阊橹?#34;NRF2调控是Sig1R介导视锥细胞拯救的核心机制"这一假说。
研究成果
激活Sig1R可增强NRF2活性与表达,减轻氧化应激并挽救rd10小鼠的视锥光感受器,但该?;ぷ饔迷贜RF2缺陷小鼠中消失,表明NRF2是Sig1R介导神经?;さ墓丶蜃?。这揭示了视网膜疾病中Sig1R与NRF2的新关联。
研究不足
该研究仅限于特定细胞系(661W)和小鼠模型(rd10、nrf2-/-),可能无法完全代表人类情况。Sig1R-NRF2相互作用的机制尚未完全阐明,且体内实验结果基于单一剂量和治疗方案。潜在的优化方向包括探索其他Sig1R配体及更广泛的遗传背景。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用661W锥细胞体外实验及rd10和rd10/nrf2-/-小鼠体内实验,探究Sig1R激活对NRF2和氧化应激的影响。方法包括细胞活力检测、免疫检测、qRT-PCR、蛋白质印迹、KEAP1-NRF2结合实验、NRF2-ARE结合实验、siRNA转染、ERG、SD-OCT及组织学分析。
2:样本选择与数据来源:
以661W锥细胞为体外模型,小鼠包括rd10(B6.CXBI-Pde6βrd10/J)和C57BL/6背景的nrf2-/-小鼠。数据来源于细胞培养和动物模型。
3:CXBI-Pde6βrd10/J)和C57BL/6背景的nrf2-/-小鼠。数据来源于细胞培养和动物模型。 实验设备与材料清单:
3. 实验设备与材料清单:设备包括荧光显微镜(Axioplan-2,卡尔蔡司)、酶标仪(Synergy H1混合多模式,BioTek Synergy 2)、发光计(Lmax11384,美谷分子仪器)、ERG装置(定制,配Psychlab EEG8放大器、美国国家仪器NI-6229数字化仪)、SD-OCT系统(Bioptigen Envisu R2200)和共聚焦显微镜(蔡司LSM 780)。材料包括DMEM、FBS、抗体(如抗Sig1R、抗NRF2)、检测试剂盒(如KEAP1-NRF2抑制剂筛选试剂盒、TransAM NRF2试剂盒)及化学试剂(如(+)-PTZ和tBHP)。
4:2)、发光计(Lmax11384,美谷分子仪器)、ERG装置(定制,配Psychlab EEG8放大器、美国国家仪器NI-6229数字化仪)、SD-OCT系统(Bioptigen Envisu R2200)和共聚焦显微镜(蔡司LSM 780)。材料包括DMEM、FBS、抗体(如抗Sig1R、抗NRF2)、检测试剂盒(如KEAP1-NRF2抑制剂筛选试剂盒、TransAM NRF2试剂盒)及化学试剂(如(+)-PTZ和tBHP)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:细胞经(+)-PTZ或tBHP处理后,通过MTT法检测活力。采用免疫检测、qRT-PCR和蛋白质印迹测定蛋白及基因表达。结合实验使用荧光偏振和荧光素酶报告基因。体内实验中,小鼠经(+)-PTZ处理后,在安乐死时进行ERG、SD-OCT和组织学分析。
5:数据分析方法:
使用GraphPad Prism和Igor Pro软件分析数据。统计检验包括t检验、ANOVA及事后检验(Holm-Bonferroni、Tukey's、Newman-Keul's)。荧光强度通过NIH ImageJ量化。
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