研究目的
为确定包括光圈孔径和光谱宽度在内的照明条件对微球辅助显微镜中焦深和成像对比度的影响。
研究成果
照明条件显著影响微球辅助显微镜的成像对比度和焦深。缩小光阑孔径并减小光谱带宽可提高对比度并增加焦深。该技术实现了200纳米的横向分辨率,相当于1.62的数值孔径,但光学像差会累积并扭曲对比度传递函数。
研究不足
该研究在空气中进行,微球直径固定为26微米,可能无法涵盖所有可能的尺寸。照明条件采用特定的科勒照明配置,若使用不同装置或介质,结果可能会有所变化。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用商用光学显微镜的反射式配置,通过实验测量与计算机模拟(有限元法)分析照明条件的影响,使用科勒照明系统进行光照控制。
2:样本选择与数据来源:
研究对象为通过聚焦离子束刻蚀制备的银纳米点阵列(200纳米×300纳米)或朗奇光栅,样本特性通过原子力显微镜表征。
3:实验设备与材料清单:
包含蔡司光学显微镜(AxioScope.A1)、卤素灯、波长滤光片(青色与蓝线)、玻璃微球(直径26微米,钠钙玻璃)、纳米定位装置(P-611.3S Nanocube)及相机(AxioCAM ICC3)。
4:1)、卤素灯、波长滤光片(青色与蓝线)、玻璃微球(直径26微米,钠钙玻璃)、纳米定位装置(P-3S Nanocube)及相机(AxioCAM ICC3)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:将微球置于样本上方,通过移动样本和微球记录不同轴向位置的虚像,利用轴向对比度曲线的半高全宽测量焦深,基于强度值计算成像对比度。
5:数据分析方法:
使用朗奇光栅测量对比传递函数(CTF),模拟过程包含电磁传播计算及波长光谱上的强度分布求和。
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wavelength filter
SP585/27
MIDOPT
Limits the spectral width of the light source to study temporal coherence effects.
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wavelength filter
FL441.6-10
Thorlabs
Limits the spectral width of the light source to study temporal coherence effects.
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microscope objective
Epiplan
Zeiss
Collects and directs the image in the imaging section.
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camera
AxioCAM ICC3
Zeiss
Records the super-resolution images.
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nano-positioning device
P-611.3S Nanocube
Physik Instrumente
Displaces the object and microsphere along the optical axis for axial sampling.
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optical microscope
AxioScope.A1
Zeiss
Used for experimental measurements in microsphere-assisted microscopy.
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halogen lamp
Provides continuous-spectrum illumination for the microscope.
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glass microsphere
Placed on the object to generate a magnified virtual image for super-resolution imaging.
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