研究目的
开发一种溶酶体靶向的单荧光探针，用于细胞内SO2和生物硫醇的双通道成像，并在无需外源酶的情况下监测它们的转化过程。
研究成果
BPO-DNSP是一种溶酶体靶向荧光探针，可在两个具有大斯托克斯位移的独立发射通道中实现SO?和生物硫醇的灵敏选择性检测。该探针成功实现了活细胞内这些物质的成像，并在不依赖外源酶的情况下监测其转化过程，为活性硫物种的生理作用提供了研究依据。未来工作应聚焦于提升反应动力学以拓展更广泛的生物应用。
研究不足
BPO-DNSP与二氧化硫和生物硫醇的反应动力学均较慢，这可能限制其实时监测应用。通过引入更强的吸电子基团进行修饰以提高反应活性和动力学性能，可优化该探针的表现。
1：实验设计与方法选择：
基于2,4-二硝基苯磺酰氯或2,4-二硝基氟苯笼蔽的色烯鎓结构，设计合成了具有SO?和生物硫醇双反应位点的荧光探针BPO-DNSP与BPO-DNP，并引入溶酶体靶向基团。采用紫外-可见吸收光谱和荧光光谱评估光学响应，使用共聚焦显微镜进行细胞成像。
2：样本选择与数据来源：
体外测试使用磷酸盐缓冲液（PBS）与二甲基亚砜（DMSO）混合溶液，体内成像选用HeLa细胞。选择性测试样本包含氨基酸、活性氧物种及活性硫物种等多种分析物。
3：实验设备与材料清单：
设备包括日立PharmaSpec UV-1900紫外-可见分光光度计、日立F7000荧光分光光度计、布鲁克AMX-600核磁共振仪、布鲁克Daltonics生物飞行时间质谱仪、蔡司LSM 780共聚焦激光扫描显微镜。材料包含Energy Chemical化学试剂、色谱用硅胶及DMEM培养基、胎牛血清等细胞培养组分。
4：实验流程与操作步骤：
通过化学反应合成探针，经柱层析纯化。将探针与分析物在PBS/DMSO溶液中孵育后测定紫外-可见及荧光特性?？瓜赴嘌?、细胞毒性检测（CCK-8）、商业追踪剂共定位实验，并在特定条件下（如探针孵育、NEM预处理、SO?添加）对HeLa细胞进行荧光成像。
5：8）、商业追踪剂共定位实验，并在特定条件下（如探针孵育、NEM预处理、SO?添加）对HeLa细胞进行荧光成像。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：分析荧光强度变化，利用滴定曲线的标准差与斜率计算检测限，通过皮尔逊相关系数进行共定位统计分析，使用Image Pro Plus软件处理图像。
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UV-visible spectrophotometer
PharmaSpec UV-1900
Hitachi
Used to obtain UV-vis absorption spectra of the probes and their interactions with analytes.
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Utilized to acquire fluorescence spectra of the probes and their responses to SO2 and biothiols.
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Recorded 1H NMR and 13C NMR spectra to characterize the synthesized probe structures.
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