研究目的
开发一种灵敏且选择性荧光测定方法，利用氮硼共掺杂碳点作为荧光探针来检测碱性磷酸酶（ALP）活性及其抑制剂。
研究成果
采用硼氮共掺杂碳点开发的荧光检测方法能有效灵敏、选择性地检测碱性磷酸酶活性及其抑制剂。该方法具有水溶性好、毒性低、合成简单且成本效益高等优势，适用于生物分析应用，包括人体血清样本检测。未来研究可着重进一步优化检测时间并拓展该方法至其他酶体系。
研究不足
该方法需要较长的2小时孵育时间，可能不适用于快速检测应用。潜在的优化方向包括缩短检测时间和提高碳点在复杂生物基质中的稳定性。
1：实验设计与方法选择：
该方法基于硼酸与顺式二醇的特异性反应，其中硼酸修饰的碳点与碱性磷酸酶（ALP）催化水解抗坏血酸2-磷酸生成的抗坏血酸结合，导致聚集和荧光猝灭。
2：样本选择与数据来源：
使用ALP酶、抗坏血酸2-磷酸及Na3VO4等抑制剂；通过人血清样本测试实际应用效果。
3：实验设备与材料清单：
由3-氨基苯硼酸合成的碳点，试剂来自阿拉丁试剂公司、上海麦克林生化有限公司、生工生物及Sigma-Aldrich；设备包括RF-6000荧光分光光度计、JEM-1400透射电镜、ESCALAB 250Xi X射线光电子能谱仪、Nicolet 380傅里叶变换红外光谱仪。
4：实验流程与操作步骤：
ALP检测时，混合DEA缓冲液、MgCl2、2-AAP、ALP、碳点及水，37°C孵育2小时，测量荧光；抑制剂检测时，先预孵育ALP与Na3VO4，再加入2-AAP和碳点，孵育后测量。
5：2-AAP、ALP、碳点及水，37°C孵育2小时，测量荧光；抑制剂检测时，先预孵育ALP与Na3VO4，再加入2-AAP和碳点，孵育后测量。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：在490 nm激发波长下测量540 nm荧光强度；计算(F0-F)/F0，基于信噪比确定检测限，计算抑制剂的IC50值，并对回收率与相对标准偏差（RSD）进行统计分析。
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Shimadzu
Recording fluorescence spectra for detection of ALP activity and inhibitors.
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