研究目的
开发用于成像hERG钾通道的AIE发光探针,旨在为细胞内hERG通道的可视化提供一种简单安全的方法,具有癌症诊断和治疗的潜在应用价值。
研究成果
成功开发了四种用于hERG通道的AIE发光探针,这些探针具有良好的荧光特性、低细胞毒性和高亲和力,其中探针L3的IC50值为0.32 nM。它们能在纳摩尔水平下有效成像细胞中的hERG通道,为先进的传感和成像应用奠定了基础,不过若要用于体内研究,还需改进发射波长。
研究不足
这些探针采用蓝绿色发射型TPE荧光团,但由于组织穿透性差和自身荧光强,限制了其在体内的应用。未来的工作应着眼于开发红光或近红外发射型探针,以扩大其适用范围。
1:实验设计与方法选择:
本研究基于AIE效应设计荧光探针,以TPE为荧光团,阿司咪唑/E-4031为药效团,通过"点击"反应合成。其原理是探针与hERG通道结合后因分子内旋转受限而发光。
2:样本选择与数据来源:
使用转染hERG的HEK293细胞进行结合亲和力、细胞毒性和成像实验。
3:实验设备与材料清单:
合成了L1-L4探针;设备包括蔡司Axio Observer A1显微镜用于成像,以及光谱测量材料(如乙腈、PBS)。
4:实验流程与操作步骤:
通过"点击"化学法合成探针;在PBS中测量光谱特性;采用放射性配体结合实验评估抑制活性;用CCK-8实验评价细胞毒性;对孵育探针(含/不含阿司咪唑抑制)的细胞进行荧光成像。
5:数据分析方法:
采用Cheng-Prusoff方程计算Ki值,使用ImageJ软件调整成像背景。
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