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通过改进的FRET/FLIM分析方法测量活细胞中转录因子Nrf2与其负调控因子Keap1的相互作用
摘要： 转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）及其主要负调控蛋白Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）构成了一套分子效应与传感系统，通过协调全面的细胞?；こ绦?，对细胞氧化还原稳态的扰动作出强效响应。在稳态条件下，Nrf2是一种短寿命蛋白，会被靶向泛素化及蛋白酶体降解。当遇到亲电试剂、氧化剂或促炎刺激时，Keap1中的半胱氨酸传感器会发生化学修饰，导致其无法靶向降解Nrf2，进而使该转录因子积累并增强细胞?；せ虻淖?。虽然通过多种体外系统已深入解析了Nrf2与Keap1的蛋白互作关系，但能在活细胞环境中评估这些互作的检测方法却很少。我们先前开发了基于成像的FLIM/FRET技术来可视化和测量单细胞中Nrf2与Keap1的相互作用。本研究旨在改进该方法以提高通量与精度，并降低细胞间差异性。为消除方向偏倚可能性，我们在Keap1与FRET受体荧光蛋白标签间引入了柔性连接肽；为确保Nrf2-FRET供体荧光蛋白标签的正确成像，采用sfGFP作为FRET供体使其成熟时间与内源性Nrf2半衰期匹配。全局分箱法提升了检测通量，而分析过程中纳入实测仪器响应函数则提高了精度。应用该方法发现结果与受体表达水平存在强共变关系，通过考虑受体水平可规避细胞间差异性，从而增强活细胞中Keap1-Nrf2相互作用测量的灵敏度。
关键词： FRET（荧光共振能量转移）、活细胞成像、荧光寿命、FLIM（荧光寿命成像显微镜）、sfGFP（超折叠绿色荧光蛋白）、蛋白质-蛋白质相互作用、全局合并、Keap1（Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1）、仪器响应函数、Nrf2（核因子E2相关因子2）
更新于2025-11-21 11:08:12
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基于切伦科夫效应的中子探测器的从头算响应函数
摘要： 美国国家点火装置（NIF）的中子飞行时间诊断系统近期配备了切伦科夫探测器。熔融石英辐射体具有亚纳秒级响应速度，并通过光学耦合与增益范围约1至10^4的微通道板光电倍增管连接。凭借快速时间响应和伽马射线灵敏度，该系统能以优于30皮秒的精度测量中子分布的首矩。为满足<1%的不确定度要求，生成从头算仪器响应函数（IRF）至关重要。研究采用蒙特卡洛建模、台架特性测试与原位对比相结合的方法。使用NIF短脉冲先进辐射成像能力光束进行的测试显示，模拟IRF与原位测量结果高度吻合?；诖油匪鉏RF计算的中子能谱首矩和第二矩与成熟闪烁体测量结果良好匹配。后续设计方案将提升灵敏度和时间响应性能。
关键词： 仪器响应函数、中子飞行时间、国家点火装置、切伦科夫探测器、Geant4建模
更新于2025-09-10 09:29:36