用于检测ATP的开启式与比率型荧光G-四链体适配体传感器方法比较

摘要： 开发了两种荧光适配体传感器方法用于生化系统中ATP的检测。第一种方法采用无标记荧光"开启"策略，利用富含鸟嘌呤的ATP适配体序列与DNA结合剂小檗碱复合物。当存在ATP时，ATP优先与其适配体结合并构象转变为G-四链体结构。小檗碱与G-四链体的结合导致前者荧光信号增强。测得ATP的检测限为3.5 μM。通过荧光、圆二色谱和熔解温度(Tm)实验验证了结合特异性及结构变化。第二种方法基于福斯特共振能量转移(FRET)的比率荧光策略，使用小檗碱作为供体（与淬灭剂金纳米棒(AuNRs)、银纳米颗粒(AgNPs)及荧光团红色量子点(RQDs)、碳点(CDs)分别标记于ATP结合适配体序列的5'和3'末端）来检测ATP。加入ATP和小檗碱后，ATP特异性结合其适配体形成G-四链体，同时小檗碱也结合该结构。这导致小檗碱荧光增强，而RQDs和CDs的荧光通过FRET作用显著猝灭。计算得到的检测限分别为3.6 μM和3.8 μM，表明这些荧光适配体传感器方法可适用于多种小分子检测。