角膜基质伤口愈合过程中角膜成纤维细胞的迁移模式与细胞外基质结构和排列相关

摘要： 目的：利用海德堡视网膜断层扫描仪罗斯特克角膜?？椋℉RT-RCM）评估全层角膜损伤后角膜细胞体内反向散射、排列、形态及连接情况，并将这些发现与整体三维（3-D）共聚焦荧光及二次谐波成像（SHG）结果进行关联。 方法：在角膜穿透性冻伤（FI，可损伤所有角膜细胞层）前及伤后3、7、14和28天，对兔角膜进行活体扫描。同时固定角膜组织并进行f-肌动蛋白和细胞核整体标记，采用3-D共聚焦荧光显微镜和SHG成像技术进行观察。 结果：使用改良的HRT-RCM能持续获取所有细胞层的完整厚度扫描图像。冻伤后，修复损伤组织的基质细胞呈现细长成纤维细胞形态，且测得细胞光散射显著增加。随着伤口愈合，这种基质混浊逐渐减轻。在伤口愈合过程中（尤其在角膜后部），通过活体（基于HRT-RCM反射图像）和离体（基于f-肌动蛋白与细胞核标记）均观察到平行且相互连接的定向角膜成纤维细胞流。二次谐波成像显示这些细胞与胶原层平行排列。 结论：改良的HRT-RCM可在活体测量亚层厚度、评估细胞形态、排列与连接情况，并估算伤口愈合过程中的基质反向散射。本研究表明，角膜成纤维细胞的排列模式与层状结构高度相关，提示基质内迁移存在接触引导现象，这可能有助于更快速的伤口再填充。