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体外荧光共聚焦显微镜对基底细胞癌Mohs手术切缘诊断准确性的前瞻性研究：753个切缘分析
摘要： 背景：目前莫氏手术中采用冷冻组织切片进行术中切缘评估。荧光共聚焦显微镜（FCM）是一种新工具，有望成为比冷冻组织学更快速有效的替代方案。 目的：本研究旨在临床环境中前瞻性评估FCM与冷冻切片在基底细胞癌（BCC）切缘评估中的准确性对比。 方法：前瞻性纳入拟行莫氏手术的BCC患者。新鲜切除标本先经FCM检查，再评估冷冻切片，最终获取永久切片以验证取样技术。对FCM与冷冻切片结果不一致的病例进行盲法复评。计算灵敏度、特异度及阳性/阴性预测值，并生成ROC曲线。 结果：共纳入127例BCC患者（女性占40.2%），评估753个切片。所有BCC均位于头颈部。与冷冻切片相比，FCM表现为79.8%灵敏度、95.8%特异度、80.5%阳性预测值和95.7%阴性预测值（曲线下面积0.88，95%CI 0.84-0.92；P<0.001）。对49例结果不一致病例进行盲法复评，其中24例假阳性、25例假阴性。另根据最终组织病理学评估比较了两种技术的表现。 结论：在莫氏手术术中BCC切缘评估方面，FCM与冷冻切片评估相比具有高度准确性。尽管部分技术问题限制其广泛应用，但新型设备有望克服这些局限。
关键词： 基底细胞癌、荧光共聚焦显微镜、莫氏手术、皮肤癌、离体共聚焦显微镜
更新于2025-09-09 09:28:46
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基于三色标度的基底细胞癌离体共聚焦显微镜检查
摘要： 离体共聚焦显微镜（CM）可在无需常规处理的情况下，实时以细胞分辨率观察新鲜切除组织。根据激光波长不同，分别采用反射模式（RCM）或荧光模式（FCM）。该技术适用于莫氏显微描记手术（MMS）中肿瘤切缘的快速评估。早期离体RCM研究使用乙酸作为对比剂增强基底细胞癌（BCC）细胞核显影，但常遗漏细小癌巢。荧光染料的应用提升了对比度，使FCM拼接图像中也能识别微小BCC结构。吖啶橙（AO）是最广泛使用的染料，其特异性结合DNA并发射荧光，从而在FCM拼接图中将活细胞核增强显示为明亮结构。尽管标准技术已实现良好分辨率与形态学关联，当前共聚焦拼接图仍以灰度格式呈现，导致皮肤病理学家常不熟悉或不适应评估这些黑白图像。 本研究报道一种新型三色标度共聚焦拼接技术（3CS-FCM），通过同步使用AO与溴化乙锭（EB）两种荧光染料实现。具体操作：先将离体皮肤样本浸入液氮冷冻，用冷冻切片机制备20-30μm厚切片，以染料混合液（AO 0.1mM+EB 0.25mM）染色约1分钟。随后将样本置于共聚焦显微镜载物台（日本尼康A1R+）进行双波长激光（405nm与488nm）同步扫描，采集的荧光信号以三色标度拼接图形式显示。完整组织处理及最终拼接图生成约需10-15分钟。 与AO不同，EB特异性结合冷冻损伤的BCC细胞DNA。经激光激发后，BCC巢因EB染色呈现红色荧光，而表皮与真皮因AO染色显示绿色荧光，蓝色对应背景组织自发荧光。所有荧光信号均由显微镜采集并转换为三色标度图像。AO与EB染色不影响后续组织固定或常规染色。图1展示了采用该技术完成的BCC拼接图，各颜色代表不同皮肤结构，显著提升可读性。这种用户友好的3CS共聚焦拼接图可使无FCM经验的专业人员解读，且冷冻样本处理能使组织完全展平，实现全样本屏幕显示。相比既往CM成像技术具有显著优势。 结论：3CS-FCM作为创新技术提供彩色图像，极大拓展了FCM应用范围。但仍需更大规模研究验证其在MMS等场景的适用性。
关键词： 荧光共聚焦显微镜、三色比例马赛克图、基底细胞癌、溴化乙锭、吖啶橙、离体共聚焦显微镜、莫氏显微描记手术
更新于2025-09-04 15:30:14