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一种用于检测视紫红质P23H突变体拯救与降解的高通量药物筛选策略
摘要： P23H突变视蛋白的固有不稳定性约占常染色体显性视网膜色素变性病例的10%。本研究旨在建立一套可靠的全面筛选策略，评估通过稳定或加速该突变视紫红质降解能否挽救表达此突变蛋白的视杆光感受器。这些策略有望发现活性化合物并阐明抑制靶标降解或增强靶标折叠等关键生物过程的分子机制。 方法：我们开发并验证了基于细胞的生物发光报告基因检测法，用于高通量筛选促进P23H突变视蛋白稳定化或降解的化合物，辅以免疫印迹和成像分析进行验证。 结果：建立了两种经验证的P23H突变视蛋白稳定化检测法（基于β-半乳糖苷酶互补反应和生物发光共振能量转移技术），以及两种评估突变蛋白降解的检测法（基于荧光消失和ALPHA免疫检测）。细胞成像显示突变视紫红质的亚细胞定位，免疫印迹则揭示了P23H突变视蛋白聚集状态和糖基化的变化。 结论：研究表明这些初始高通量筛选及后续检测能有效识别治疗性活性化合物（即使针对突变视紫红质这类难靶标的蛋白）。这些检测方法具有良好的可扩展性且已通过模型化合物验证。结合自动化成像与经典免疫检测的高通量筛选技术，可进一步解析这种重要视觉系统蛋白生物合成与降解过程中的多个步骤和通路。
关键词： 眼药理学、视网膜变性、G蛋白偶联受体、光转导、视杆细胞、视紫红质、错误折叠蛋白
更新于2025-11-21 11:20:48
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锰增强磁共振成像用于视网膜退行性疾病治疗的临床前评估
摘要： 目的：应用锰增强磁共振成像（MEMRI）评估接受预防性药物治疗的光诱导视网膜变性小鼠的离子通道活性及视网膜结构。 方法：对Abca4?/?Rdh8?/?双敲除小鼠（含/不含预防性视网膜胺Ret-NH2处理）进行强光照射。单眼玻璃体内注射MnCl2两小时后，采用锰增强MRI成像视网膜。评估各实验组视网膜与玻璃体液的对比增强MRI图像，并与治疗方案进行关联分析。通过光学相干断层扫描（OCT）、组织学检查和视网膜电图（ERG）等标准视网膜结构与功能评估方法对结果进行比对。 结果：未照射及Ret-NH2处理照射小鼠的视网膜呈现高锰增强信号，而无Ret-NH2处理的强光照射小鼠视网膜无显著增强（P<0.0005）。Ret-NH2治疗组玻璃体液亦观察到较高信号增强。视网膜胺处理小鼠的高MEMRI信号增强与其视网膜结构完整性（OCT证实）及功能状态（组织学及强光反应性ERG证实）具有相关性。 结论：基于离子通道活性测量，锰增强MRI可评估视网膜对预防性治疗的响应。该方法可作为视网膜病变新型预防疗法临床前开发中的补充评估工具。
关键词： 锰增强磁共振成像、疗效评估、视网膜变性、视黄基胺
更新于2025-09-23 15:22:29
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与犬类非综合征性视网膜退化相关的复杂结构PPT1变异体
摘要： 视杆细胞和视锥细胞光感受器是视网膜中专门负责视觉感知的神经元，它们通过捕获光线并将其转化为神经信号发挥关键作用。视杆细胞和/或视锥细胞功能异常最终可能导致进行性退化并引发失明。在人类中，许多视杆细胞或视杆-视锥细胞退行性疾病被归类为色素性视网膜炎（RP）。犬类也存在类似的疾病群，称为进行性视网膜萎缩（PRA）。这些疾病通常由单基因缺陷引起，并遵循孟德尔遗传规律。 我们收集了51份患有PRA的迷你雪纳瑞犬DNA样本（平均诊断年龄约3.9±1岁），以及56份同品种临床正常对照样本（平均年龄约6.6±2.8岁）。谱系分析表明PRA呈单基因常染色体隐性遗传。全基因组关联研究（GWAS）和纯合性定位将关键区间锁定在CFA15基因组前4,796,806个碱基对范围内。通过对两个患病个体、一个携带者和一个对照个体进行全基因组测序，在关键区间内鉴定出两个候选变异：HIVEP3基因的内含子SNV变异，以及包含PPT1基因第5外显子重复、转换和插入的复合结构变异（命名为PPT1dci）。在22个病例队列中确认PPT1dci为纯合状态，另有12个病例携带该CFA15单体型纯合。此外，该变异在6只年龄超过平均发病年龄的非患病犬中也呈纯合状态。HIVEP3变异在PPT1dci纯合或携带定位CFA15单体型的病例中呈现杂合（n=4）或野生型纯合（n=1）状态。 我们从PPT1dci纯合的PRA病例白细胞mRNA中检测到野生型及三种异常PPT1转录本，这些异常转录本涉及重复第5外显子的纳入及隐蔽剪接位点激活后新外显子的出现。携带PPT1dci变异纯合的犬只未表现出神经系统症状。因此我们认为PPT1dci是导致迷你雪纳瑞犬非综合征型PRA（PRAPPT1）的致病因素，该病具有不完全外显率，可能与野生型转录本的存在有关。据我们所知，这是首个与PPT1变异相关的孤立性视网膜退化病例。
关键词： 进行性视网膜萎缩、棕榈酰蛋白硫酯酶、犬、复合变异型、PRA、视网膜变性、全基因组测序
更新于2025-09-23 15:22:29
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补充绿原酸可改善视网膜色素变性患者的多焦视网膜电图
摘要： 为评估叶绿酸补充剂对视网膜色素变性患者的效果，我们通过多焦视网膜电图检测客观视觉功能变化，并结合视力、视野、标准视网膜电图及对比敏感度进行评估。本研究为前瞻性、非对照单臂试验，纳入18例确诊视网膜色素变性患者。在补充叶绿酸3个月后，重复测量多焦视网膜电图、早期治疗糖尿病性视网膜病变研究字母表测定的最佳矫正视力、Humphrey视野分析仪II视野检查总点数、视网膜电图及对比敏感度。结果显示：补充3个月后，多焦视网膜电图第5环振幅显著升高（7.2±9.5 vs 8.3±10.8 nV/deg2，均值±标准差，P=0.022），而最佳矫正视力、Humphrey视野分析仪总点数、标准视网膜电图30Hz闪烁振幅及对比敏感度均无显著变化。叶绿酸可能对视网膜变性边缘的外周区域具有改善作用，可作为抗氧化剂用于视网膜色素变性的治疗管理。
关键词： 色素性视网膜炎、氧化应激、绿原酸、视网膜变性、抗氧化剂
更新于2025-09-23 15:22:29
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在视网膜退化小鼠模型中玻璃体内注射人骨髓CD34+干细胞
摘要： 目的：玻璃体内注射小鼠谱系阴性骨髓（BM）造血细胞可延缓视网膜退化。由于人骨髓CD34?造血细胞与小鼠细胞不完全可比，本研究采用小鼠模型探究玻璃体内注射人骨髓CD34?细胞对退化视网膜的影响。 方法：系统性使用他克莫司和雷帕霉素免疫抑制的C3H/HeJrd1/rd1小鼠，玻璃体内注射磷酸盐缓冲液（PBS，n=16）或经磁珠分选并标记增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的人骨髓CD34?细胞（n=16）。注射后1周和4周，通过扫描激光检眼镜（SLO）/光学相干断层扫描（OCT）成像及视网膜电图（ERG）检测。处死后取眼球进行视网膜免疫组化和微阵列分析。 结果：活体SLO眼底成像显示玻璃体内注射后EGFP标记细胞定位于眼内。同步OCT分析发现EGFP标记细胞位于视网膜表面，形成锯齿状结构。视网膜免疫组化证实EGFP标记细胞存在于视网膜表面及神经节细胞邻近区域。所有眼球的ERG检测显示注射后1周和4周均呈平坦信号。细胞注射后的视网膜微阵列分析显示超过300个鼠源基因表达改变，主要涉及光感受器功能维持、凋亡调控相关基因。 结论：人骨髓CD34?细胞能快速归巢至退化视网膜表面。尽管在此快速进展性视网膜退化模型中ERG未显示功能获益，但CD34?细胞治疗相关的视网膜分子变化提示其潜在营养再生效应，值得进一步研究。
关键词： 玻璃体内，干细胞，CD34阳性，视网膜变性
更新于2025-09-23 15:22:29
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RIPK1抑制化合物在视网膜退行性疾病体内模型中的?；ぷ饔?
摘要： 受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）在坏死性凋亡中起关键作用，这是一种程序性坏死类型，与青光眼和干性年龄相关性黄斑变性（AMD）等眼部疾病相关。我们先前研发了RIPK1抑制化合物（RIC），其生化特性和作用机制与原型RIPK1抑制剂necrostatin-1存在显著差异。腹腔注射RIC对视网膜神经节细胞具有青光眼损伤?；ぷ饔?。本研究探讨了RIC对碘酸钠（SI）诱导的视网膜色素上皮（RPE）损伤的?；ばЧ盟鹕擞敫尚訟MD发病机制相关。滴眼给药使RIC抵达视网膜后，有效预防了SI诱导的视网膜退变中的RPE损失。在SI注射兔和碘乙酸处理迷你猪模型中，眼底镜检查和视网膜电图分析均证实RIC持续发挥视网膜?；ぷ饔?。此外，RIC的体内?；ばЧ庞贏CU-4429和多西环素（其他进入干性AMD临床试验的药物），且大鼠局部给药未显示视网膜毒性。综上，RIC展现出优异的视网膜穿透性，在干性AMD发病过程中以高效能预防视网膜退变。
关键词： 视网膜色素上皮?；?，受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1），干性年龄相关性黄斑变性，局部应用，视网膜变性，RIPK1抑制化合物（RIC）
更新于2025-09-23 15:21:01
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超高分辨率小鼠光学相干断层扫描技术助力视网膜基因治疗研究中的眼内注射
摘要： 高分辨率谱域光学相干断层扫描（HR-SD-OCT）用于监测活体小鼠模型中光感受器退化的进展、评估治疗药物递送至视网膜下空间的效果，并在体内评价毒性与疗效。该技术采用近红外光（800-880 nm），其光学系统专为小鼠眼睛独特结构设计，具备亚2微米轴向分辨率。通过对外层视网膜（光感受器）变性转基因小鼠模型及对照组的成像来评估疾病进展。使用拉制玻璃微针经巩膜和脉络膜途径进行视网膜下注射腺相关病毒（AAV）或纳米颗粒（NP）。需先将针头精确定位至视网膜下空间，再通过校准压力注射将液体输送至该区域。我们在视网膜成像系统（RIS）上实施实时视网膜下手术。HR-SD-OCT显示因表达毒性突变人视紫红质（P347S）（RHOP347S）转基因导致小鼠出现进行性均匀视网膜退化。该技术可严格量化所有视网膜层，其中外核层（ONL）厚度与光感受器外节长度（OSL）的测量值与光感受器活力、退化或挽救情况相关。RIS递送系统能对新生（约P10-14）或成年小鼠的视网膜下注射实现实时可视化，HR-SD-OCT可即时判定递送成功与否并绘制作用区域范围。该工具不仅能评估小鼠视网膜下手术效果，还可活体测量光感受器活力，适用于筛选实验动物队列以评价临床前基因治疗研究中视网膜退化程度、毒性及治疗性挽救效果。
关键词： 光学相干断层扫描、视网膜变性、成像、实时、视网膜、显微镜、眼内注射、临床前、活体、光感受器、格林诺夫立体显微镜、视网膜下。
更新于2025-09-23 15:21:01
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σ1受体缺失加速视网膜色素变性小鼠模型中光感受器细胞死亡
摘要： Sigma 1受体（Sig1R）是神经退行性疾?。òㄊ油ぜ膊。┑男滦椭瘟瓢械?。Sig1R基因敲除小鼠会出现迟发性视网膜变性伴神经节细胞丢失，且该症状在应激状态下会加重。目前尚不清楚Sig1R是否对维持其他视网膜神经元起作用，本研究通过rd10小鼠（严重光感受器变性模型）对此进行了探究。 方法：采用野生型、rd10及rd10/Sig1R基因敲除小鼠进行视网膜电图（ERG）和频域光学相干断层扫描（SD-OCT），以评估原位视觉功能与结构。对显微成像的视网膜进行形态计量分析、视锥细胞免疫检测及胶质增生分析。从mRNA/蛋白水平评估氧化应激与内质网（ER）应激。 结果：P28时rd10/Sig1R基因敲除小鼠明视ERG反应显著弱于rd10小鼠（31±6 vs 56±7 μV），表明Sig1R缺失会加速视锥细胞丢失。P28时SD-OCT显示rd10/Sig1R基因敲除小鼠视网膜厚度仅为野生型的60%，显著薄于rd10小鼠的80%。形态计量分析揭示rd10/Sig1R基因敲除小鼠比rd10小鼠存在更严重的光感受器核丢失。P28和P35时，rd10/Sig1R基因敲除小鼠的光感受器数量分别比rd10小鼠减少35%和60%。花生凝集素标记的视锥细胞显著减少；rd10/Sig1R基因敲除小鼠的胶质增生显著加剧。P21时，rd10/Sig1R基因敲除小鼠的NRF2水平较rd10小鼠升高，下游抗氧化剂增加，提示存在氧化应激。P28时，rd10/Sig1R基因敲除小鼠的ER应激相关基因/蛋白（尤其是未折叠蛋白反应强效转录激活因子XBP1和促凋亡转录因子CHOP）较rd10小鼠显著上调。 结论：rd10/Sig1R基因敲除小鼠的光感受器变性加速且视锥功能更早衰退，凸显了Sig1R作为视网膜细胞存活调节因子的重要性。
关键词： 视锥细胞、视网膜神经保护、视杆细胞、视网膜变性、rd10小鼠、视网膜电图（ERG）
更新于2025-09-24 03:35:06
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果蝇光感受器中视紫红质水平的维持及光转导过程需要蛋白激酶D
摘要： 在果蝇光转导过程中，G蛋白偶联受体（GPCR）视紫红质（Rh1）通过G蛋白偶联激活磷脂酶C（PLC），将光子吸收转化为电信号。质膜中Rh1的水平对正常光敏感度至关重要。本研究发现蛋白激酶D（dPKD）调控成年感光细胞中Rh1的稳态。尽管dPKD功能缺失突变体（dPKDH）的眼睛发育和视网膜结构未受影响，但其表现出Rh1水平升高。值得注意的是，尽管Rh1水平升高，这些果蝇的光电反应却未出现缺陷。相比之下，感光细胞质膜中另一种跨膜蛋白瞬时受体电位（TRP）的水平在dPKDH中未发生改变。结果表明dPKD对眼睛发育非必需，但对维持成年感光细胞中Rh1水平具有重要作用。
关键词： 视网膜电图（ERG）、光转导、视网膜变性、视紫红质、果蝇、视紫红质负载囊泡（RLVs）、蛋白激酶D
更新于2025-09-24 07:36:20
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膜型卷曲相关蛋白调控脂质组与转录以维持感光细胞功能
摘要： 光感受器（PRC）膜结构和基因调控的分子决策者对理解视觉及致盲性视网膜退化至关重要。通过使用会引发PRC退化的Mfrprd6小鼠模型，我们发现膜型卷曲相关蛋白（MFRP）以类似于脂联素受体1（AdipoR1）的方式参与二十二碳六烯酸（DHA，22:6）的富集过程。非靶向成像质谱分析显示，Adipor1?/?和Mfrprd6视网膜中含22:6及超长链多不饱和脂肪酸（VLC-PUFAs）的磷脂呈现细胞特异性减少。两种突变体均表现出促炎信号通路的基因表达增强，而PRC功能相关编码蛋白的基因表达降低。由此我们提出：这两种蛋白对视网膜脂质组膜结构、视觉功能维持以及视网膜退行性疾病早期病理机制的理解均具有关键作用。
关键词： 视网膜色素上皮细胞、视网膜变性、Adipor1、炎症信号传导、极长链多不饱和脂肪酸、基质辅助激光解吸电离成像质谱法（MALDI IMS）
更新于2025-09-12 10:27:22