一种从新鲜冷冻小鼠骨骼中获取高质量RNA的激光捕获显微切割方案

摘要： RNA产量和完整性对RNA分析至关重要。然而，在整个激光捕获显微切割（LCM）过程中保持RNA完整性往往存在技术挑战。由于LCM研究处理的样本量极少，RNA产量有限的问题也备受关注。因此，本研究开发了一套LCM操作流程，旨在获取足量高质量RNA用于骨细胞基因表达分析。我们评估了染色方案、冰冻切片厚度、显微切割组织量、RNA提取试剂盒及所用LCM系统对显微切割骨细胞RNA产量和完整性的影响。采用粘附薄膜制备8微米厚冰冻骨切片，并使用商业LCM染色剂的快速方案进行染色。样本夹在聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜与粘附薄膜之间，通过重力收集样本的LCM系统和基于柱式的RNA提取方法，最终获得产量充足且质量优异的RNA。虽然本研究聚焦于小鼠股骨切片，但所述LCM流程可用于研究生理状态及疾病进程中任何硬组织细胞的原位基因表达。