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利用偏振激发发射矩阵（pEEM）光谱和PARAFAC研究免疫球蛋白G的本征态荧光发射
摘要： 利用各向异性分辨多维发射光谱技术(ARMES)可提升蛋白质结构分析中的内源荧光光谱(IFS)测量效果。该技术通过结合各向异性测量与化学计量学分析，旨在解决色氨酸(Trp)与酪氨酸(Tyr)的谱重叠问题并解析发光组分。本研究首次采用偏振激发-发射矩阵(pEEM)测量与平行因子(PARAFAC)分析法，对天然状态兔免疫球蛋白G(rIgG)的内源荧光特性进行研究。由于存在福斯特共振能量转移(FRET)，蛋白质IFS属于非三线性系统，内滤效应和瑞利/拉曼散射也会导致非三线性（二者可通过数据预处理校正），但IFS中的FRET效应无法消除，因此我们重点评估了不同预处理方法对PARAFAC分析IFS数据的影响。需特别注意数据预处理与插值操作——它们会影响PARAFAC建模及最终获得的各向异性值，其根源在于瑞利散射残余散粒噪声与发射光谱蓝边的重叠。在15-35℃温度范围内采集解冻rIgG溶液的pEEM光谱，预期该温区能引发足够发射变化以实现组分解析而不造成显著结构改变。但实际仅观察到热运动诱导猝灭导致的整体强度变化，该现象通过PARAFAC得分得到验证。PARAFAC从归一化pEEM数据中解析出占主导地位的单一组分(>99%)（包含偏振与非偏振发射数据），主要反映Tyr向Trp的异质FRET过程；另存在极微弱组分(<1%)可能源自直接激发的Trp发射。归一化pEEM数据的PARAFAC得分显示极小变化，进一步证实结构改变可忽略。本研究为应用PARAFAC分析IgG类蛋白质IFS（包括变性、聚集等重要过程）奠定了基础。
关键词： 多维、荧光、平行因子分析、各向异性、蛋白质、光谱学、免疫球蛋白G
更新于2025-11-14 15:32:45
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源自蛋白A的Z结构域与免疫球蛋白G之间的光控可逆结合
摘要： 通过偶氮苯衍生物的反式与顺式异构体之间的光异构化反应，实现了以可逆且非破坏性的方式调控生物分子功能。本研究将一类可工程化改造以结合多种靶蛋白的小型螺旋状蛋白质——亲和体分子，通过在其分子结构中引入光开关偶氮苯衍生物进行研究。采用固相肽合成法制备了三种不同的Z结构域变体，并通过硫醇定向化学法将其与基于偶氮苯的光开关连接。通过筛选这些蛋白质与IgG-琼脂糖亲和柱的结合能力及光解离特性，发现其中一种Z结构域变体ZC3能高效结合该柱层析介质，并可通过400纳米波长光照实现洗脱。在反向亲和层析实验中，当ZC3变体偶联至琼脂糖基质时，人源IgG1可被捕获至层析柱并通过光照部分洗脱。表面等离子共振(SPR)技术对偶联偶氮苯的ZC3结构域的进一步研究表明其具有高亲和力IgG结合特性，圆二色谱(CD)分析则显示该蛋白质具有高含量的α-螺旋二级结构。
关键词： 免疫球蛋白G、亲和体分子、光开关、Z结构域、亲和层析、偶氮苯
更新于2025-09-19 17:13:59
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基于竞争免疫传感策略和磁性生物分离的猪IgG选择性高灵敏荧光检测方法
摘要： 基于竞争免疫分析和磁性生物分离技术，开发了一种新型荧光检测方法并应用于血清样品中猪免疫球蛋白G（IgG）的测定。通过化学共沉淀法合成了核壳结构Fe3O4@SiO2纳米颗粒，随后进行氨基功能化并固定猪IgG抗体。将合成的Fe3O4@SiO2-抗体纳米颗粒作为探针，用于对样品中目标抗原与荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记抗原的竞争性免疫识别。通过磁分离结合这两种抗原的探针后，测量游离FITC标记抗原的荧光信号来定量目标抗原——由于抗体对这两类抗原的竞争性结合特性，上清液中FITC标记抗原比例会随样品中目标抗原含量变化而改变。在最优条件下，荧光强度变化与猪IgG浓度在0.75至23.50 μg L?1范围内呈线性关系，检测限（LOD）为0.031 μg L?1。这种采用简易制备探针的荧光竞争法，可为复杂基质样品中目标蛋白的检测提供快速、特异且高灵敏的免疫分析方案。
关键词： 纳米颗粒、免疫球蛋白G、磁性生物分离、荧光、竞争性免疫分析
更新于2025-09-10 09:29:36