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散射增强相位对比显微镜用于区分活细胞中活性纳米颗粒运输的机制
摘要： 理解工程化纳米材料（ENMs）被哺乳动物细胞摄取和运输的动态过程，是设计下一代药物递送系统的重要环节。然而，为追踪这些材料及其与细胞的相互作用，现有研究通常依赖表面结合的荧光标记物——这类标记可能改变天然的细胞识别事件。因此，仍需开发不依赖表面修饰即可监测ENM-细胞相互作用的方法。针对这一需求，本研究展示如何将散射增强相衬（SEPC）显微镜拓展为通用的无标记方法，用于监测纳米颗粒的摄取与运输动态。通过洛伦兹-米理论确定适用材料范围，预测可观测单个颗粒尺寸下限约35纳米。实验验证表明，SEPC适用于金、银、二氧化钛、二氧化铈、氧化铝和氧化铁等多种金属及金属氧化物纳米颗粒。进一步证实该技术能以定量时序方式区分主动细胞运输的不同模式（包括胞内运输与膜辅助运输）。最后，我们结合微接触印刷技术标准化多细胞间的运输动态，从而精确研究二氧化钛纳米颗粒的群体摄取行为，揭示出细胞内存在三个特征性颗粒运输区域，证明膜动力学对调控颗粒流动具有重要作用。通过规避荧光标记，SEPC可在纳米材料天然状态下理性探究其表面特性及其在内吞作用与细胞运输中的角色。
关键词： 散射增强相位对比技术、洛伦兹-米理论、内吞作用、纳米-生物界面、纳米颗粒
更新于2025-09-23 15:23:52
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光遗传学控制沟槽形成的SRRF-stream成像显示，局部且协调的内吞和外排作用介导了膜重塑。
摘要： 胞质分裂过程中分裂沟的形成涉及广泛的膜重塑。由于缺乏动态控制这些过程的方法，研究这种重塑的机制一直是个挑战。我们采用亚细胞光遗传学方法实现了对该过程的随意诱导，发现分裂沟形成由肌动球蛋白收缩力、质膜逆向流动、局部膜张力降低及内吞作用共同介导。通过荧光恢复后检测（FRAP）、四维成像以及对内吞或外排作用的抑制/上调实验表明，依赖ARF6和Exo70的局部外排作用可能为细胞间桥延长提供模型依据。全内反射荧光显微镜（TIRF）与超分辨率径向涨落成像（SRRF）显示，在新生子细胞前沿存在VAMP2介导的局部外排作用，以及囊泡膜脂质向质膜的整合。因此，空间分离但协同进行的质膜消耗与补充可能是胞质分裂过程中膜重塑的重要机制。
关键词： SRRF流式成像、光遗传学、分裂沟、膜重塑、内吞作用、外排作用
更新于2025-09-19 17:13:59
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荧光标记羟丙基-β-环糊精的药代动力学特性
摘要： 2-羟丙基-β-环糊精（HPBCD）被用于药物制剂配方，近期还获得了治疗尼曼-匹克病C型的孤儿药认定。HPBCD的具体作用机制和副作用尚未完全阐明。我们采用荧光标记的羟丙基-β-环糊精（FITC-HPBCD）研究其小鼠体内的药代动力学参数，并与天然HPBCD数据进行对比。研究发现FITC-HPBCD具有与HPBCD相似的快速分布和消除特征。值得注意的是，实验动物可分为两组：一组符合双室一级动力学模型，另一组则不符合。组织分布研究表明，给药60分钟后肾脏可检测到大量FITC-HPBCD，这与其经肾排泄的特性相关。离体荧光成像显示，给药30分钟后肺、肝、脑和脾脏均可测得荧光信号。为模拟FITC-HPBCD在血管壁中的相互作用及细胞分布，我们用人脐静脉内皮细胞（HUVECs）进行实验，首次证实该化合物在给药30分钟后可出现在胞质小泡中。FITC-HPBCD具有与HPBCD相似的药代动力学特征，能为深入解析HPBCD的作用机制提供新信息。
关键词： 内吞作用、药代动力学、荧光、羟丙基-β-环糊精、人脐静脉内皮细胞
更新于2025-09-16 10:30:52
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口服硫化银量子点实现肠道快速摄取并靶向递送至肝脏内皮细胞
摘要： 量子点（QDs）可用于治疗药物的成像与递送。本研究通过口服给药证实：量子点能快速穿过小肠吸收，并在体内外实验中将结合材料靶向递送至肝窦内皮细胞（LSECs）或肝细胞。我们采用3H-油酸进行量子点放射性标记，同时在药物结合位点嵌入荧光标签或14C-二甲双胍，比较了三种生物聚合物壳层涂层（甲醛处理血清白蛋白FSA、明胶、肝素）。量子点穿过小肠进入肠系膜静脉的过程由网格蛋白介导的内吞作用和微胞饮作用调控?？诜亮恐?0%的量子点在30分钟内快速分布至肝脏，采用FSA生物聚合物涂层时该比例提升至85%。FSA涂层使LSECs摄取量增加3倍，而明胶涂层将肝细胞摄取率从40%提高到85%。免疫荧光和透射电镜证实量子点定位于LSECs。给药24小时内85%的量子点被清除。14C-二甲双胍与QD-FSA结合后，其口服2小时的生物利用度提高5倍，且该量子点使二甲双胍在LSECs中的摄取量提升50倍。SK-Hep1细胞（LSECs永生化细胞系）通过网格蛋白和 caveolae 介导途径内化量子点，并将其转运至溶酶体。研究表明：采用FSA或明胶生物聚合物层包被的量子点口服后，能高度特异性靶向LSECs或肝细胞，从而提高二甲双胍的生物利用度及其向LSECs的递送效率。
关键词： 纳米、小鼠、二甲双胍、生物聚合物、内吞作用
更新于2025-09-16 10:30:52
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阐明用于光动力治疗的噻吩基有机D-π-A敏化剂的作用机制
摘要： 光动力疗法（PDT）是一种非侵入性、选择性且具有成本效益的癌症治疗方法?？⒁子诨袢∏夷芸焖俳薪峁剐奘我越徊教嵘齈DT效果的模板仍具有重要意义。我们先前报道了以噻吩为基底的有机D-π-A型光敏剂模板，其由电子供体（D）单元、π共轭桥（π）单元和电子受体（A）单元构成，可作为PDT光敏剂的有效设计模板。初步构效关系研究表明，A单元的结构会显著影响其光毒性。本研究评估了含不同A单元的D-π-A光敏剂的吸光特性、细胞摄取能力及光氧化能力，并通过这三项指标阐释了其光毒性强弱规律。此外，我们观察到含有羧酸或酰胺类A单元的两亲性光敏剂能形成聚集体，主要通过内吞作用穿透细胞。
关键词： 有机染料、光动力疗法、敏化剂、单线态氧、内吞作用
更新于2025-09-09 09:28:46
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多价生物聚合物包覆的金纳米粒子作为稳定且无非特异性内吞作用的细胞标记剂
摘要： 本研究发现羧甲基纤维素（CMC）可作为金纳米颗粒（AuNPs）细胞标记的稳定包覆剂。通过简单混合并离心去除未结合的CMC，即可实现AuNPs的CMC包覆。CMC包覆的AuNPs在高达100 mM NaCl和β-巯基乙醇存在下仍表现出高稳定性。结构分析表明，CMC在AuNPs表面的多重结合实现了稳定?；ぁＮ刑匾煨韵赴昙?，将抗CD44抗体偶联至CMC包覆的AuNPs。通过将这些纳米颗粒加入含HeLa细胞的培养体系中，验证了抗体偶联AuNPs的细胞标记性能。我们观察到经抗体偶联AuNPs孵育的HeLa细胞内存在AuNPs的光散射斑点，且未发生非特异性内吞作用。然而，柠檬酸盐包覆的AuNPs簇则通过受体介导的内吞作用被捕获于细胞内。此外，未观察到细胞毒性，证实CMC包覆的AuNPs可作为稳定且生物相容的细胞标记剂。
关键词： 内吞作用、金纳米粒子、暗场、羧甲基纤维素、癌症、细胞标记剂、CD44
更新于2025-09-04 15:30:14
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卵巢癌临床组织识别及体内成像的DNA适配体表征
摘要： 背景/目的：卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，且早期难以发现。卵巢癌早期诊断效率低下是其高死亡率的主要原因。适配体作为化学抗体，是能以高亲和力靶向细胞或分子的单链DNA或RNA寡核苷酸。方法：通过流式细胞术分析测定R13的结合能力；在卵巢癌患者血清中检测R13的稳定性；利用共聚焦显微镜成像验证R13的内化过程。本研究采用包含80例卵巢癌组织、10例正常卵巢组织及6例输卵管组织的微阵列样本。进一步在NOD/SCID小鼠体内肿瘤模型中确认R13的靶向能力。结果：本研究发现适配体R13与卵巢癌细胞结合的解离常数达纳摩尔级，该结果通过组织成像得到进一步验证。随后证实R13的靶标为膜蛋白，其内化过程通过小窝蛋白介导和网格蛋白介导途径实现。通过小鼠模型中A2780肿瘤成像确定R13的靶向功能。结论：这些发现表明R13是诊断卵巢癌及靶向递送治疗药物的极具前景的新型工具。
关键词： 内吞作用、DNA适配体、膜蛋白、卵巢癌、裸鼠、组织微阵列
更新于2025-09-04 15:30:14