利用绿色荧光蛋白检测内膜蛋白OppC的可溶性表达及体内相互作用

摘要： 本研究分析了寡肽通透酶（Opp）蛋白的体内相互作用系统，通过灵活运用绿色荧光蛋白（GFP）构建了内膜蛋白OppC的高表达系统。将编码寡肽转运体跨膜组分的大肠杆菌OppC基因克隆至不同载体，转化至不同大肠杆菌菌株并优化表达条件，通过凝胶内分析和Western印迹评估质粒与表达菌株对OppC产量的影响。携带GFP报告基因的pWaldo-GFPe载体转化E. coli C43(DE3)后产生的OppC，为生化和生物物理研究提供了足量功能性蛋白。采用GFP片段重组法检测到寡肽通透酶蛋白间的体内相互作用：底物结合蛋白OppA与其他组分无相互作用，ATP结合组分OppD不与OppF互作；而OppD和OppF均与跨膜组分OppB、OppC相互作用，OppB还直接与OppC结合。通过构建OppC基因缺失株确定其体内功能——对肽段摄取至关重要但对细胞存活非必需。这些结果有助于阐明细菌的寡肽转运机制。