SLIM显微镜技术可用于观察专为牛精子介导基因转移设计的含DNA脂质体

摘要： 裸露的DNA已被证实能自然结合精子，这种方法称为精子介导的基因转移（SMGT）。基于这些观察，我们利用脂质体研究了外源DNA与精子结合的效率。本实验中，我们分析了冷冻解冻牛精子的筛选方法，并评估了外源DNA与这些精子的结合情况。为确定最佳筛选方法，我们采用计算机辅助精液分析（CASA）。分别使用Percoll或上游法筛选精子后，与脂质体-DNA复合物共孵育长达3小时。分别在1小时和3小时后收集样本。我们以增强型绿色荧光蛋白（eGFP）结合脂质体作为外源DNA结合的标记物。每种筛选方法设置五个处理组：(1)无孵育、无脂质体和无DNA；(2)仅孵育、无脂质体和无DNA；(3)孵育含脂质体但无DNA；(4)孵育含脂质体和1μg DNA；(5)孵育含脂质体和10μg DNA。CASA检测显示，Percoll组对照组与其他处理组在总活力和快速运动力方面存在统计学显著差异（P<0.01），而上游法则无此现象，因此选择上游法作为最佳筛选方法。为确认脂质体-DNA复合物是否结合精子，采用实时PCR检测GFP DNA，并通过空间光干涉显微镜（SLIM）分析精子图像。SLIM证实精子头部和尾部存在脂质体。