研究目的
利用脂质体研究外源DNA与精子结合的效率，并评估外源DNA与冷冻-解冻牛精子的结合情况。
研究成果
游泳法被确定为精子筛选单基因组转移（SMGT）的首选方法，可与脂质体共孵育长达3小时且不影响精子活力。SLIM显微镜技术无需染色或标记即可成功识别与精子结合的脂质体。需进一步研究以通过SMGT技术获得大量转基因转化牛囊胚。
研究不足
该研究使用了冷冻保存的公牛精液，可能无法完全代表新鲜精液的情况。未评估DNA整合到胚胎基因组中的效率。
1：实验设计与方法选择：
本研究比较了两种精子筛选方法（Percoll和上游法），并利用脂质体评估外源DNA与精子的结合情况。通过计算机辅助精液分析系统（CASA）确定最佳筛选方法。
2：样本选择与数据来源：
使用三头公牛的冷冻解冻牛精子。精子经Percoll或上游法筛选后，与脂质体-DNA复合物共孵育。
3：实验设备与材料清单：
设备包括CASA IVOS系统、SLIM显微镜和qPCR仪；材料包含脂质体、DNA构建体（pIRES2-EGFP）及精子-TALP培养液。
4：实验流程与操作步骤：
筛选精子后与脂质体-DNA复合物共孵育，分别通过运动性检测（CASA）、DNA结合分析（qPCR）及脂质体附着检测（SLIM）进行评估。
5：数据分析方法：
采用Yates校正卡方检验和广义最小二乘方差分析（GLS ANOVA）进行统计分析。
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获取完整内容-
NanoDrop 1000 Spectrophotometer
1000
Thermo Fisher Scientific
Measure DNA concentration.
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CASA IVOS system
Hamilton Thorne Bioscience
Measure total motility, rapid motility, and progressive motility of sperm.
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SLIM microscope
Detect the presence and size of attached liposomes on the sperm head and tail.
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SYBR Select Master Mix for CFX
Thermo Fisher Scientific
Used in qPCR to detect GFP DNA.
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Percoll
Sigma-Aldrich
Used to select sperm.
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Sperm-TALP
Medium used in sperm selection and incubation.
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pIRES2-EGFP
Clonetech Laboratories Inc. (now Takara Bio USA Inc.)
DNA construct used as a marker for exogenous DNA binding.
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