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一种用于检测视紫红质P23H突变体拯救与降解的高通量药物筛选策略
摘要： P23H突变视蛋白的固有不稳定性约占常染色体显性视网膜色素变性病例的10%。本研究旨在建立一套可靠的全面筛选策略，评估通过稳定或加速该突变视紫红质降解能否挽救表达此突变蛋白的视杆光感受器。这些策略有望发现活性化合物并阐明抑制靶标降解或增强靶标折叠等关键生物过程的分子机制。 方法：我们开发并验证了基于细胞的生物发光报告基因检测法，用于高通量筛选促进P23H突变视蛋白稳定化或降解的化合物，辅以免疫印迹和成像分析进行验证。 结果：建立了两种经验证的P23H突变视蛋白稳定化检测法（基于β-半乳糖苷酶互补反应和生物发光共振能量转移技术），以及两种评估突变蛋白降解的检测法（基于荧光消失和ALPHA免疫检测）。细胞成像显示突变视紫红质的亚细胞定位，免疫印迹则揭示了P23H突变视蛋白聚集状态和糖基化的变化。 结论：研究表明这些初始高通量筛选及后续检测能有效识别治疗性活性化合物（即使针对突变视紫红质这类难靶标的蛋白）。这些检测方法具有良好的可扩展性且已通过模型化合物验证。结合自动化成像与经典免疫检测的高通量筛选技术，可进一步解析这种重要视觉系统蛋白生物合成与降解过程中的多个步骤和通路。
关键词： 眼药理学、视网膜变性、G蛋白偶联受体、光转导、视杆细胞、视紫红质、错误折叠蛋白
更新于2025-11-21 11:20:48
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刺激强度和视野位置对视网膜杆细胞与锥细胞介导的局部光刺激瞳孔反应的影响
摘要： 目的：评估刺激强度对中央和周边视野小范围光刺激引发的视杆与视锥细胞介导的瞳孔光反射（PLR）的影响。 方法：在健康受试者右眼测试小范围（0.43°）色光刺激引发的PLR。采用色觉瞳孔测量仪，在昏暗或蓝光适应条件下，分别以递增光强（0.5–3.75 log cd/m2）向周边（21.21°）及中央（4.24°）视野区域呈现蓝光（485±20 nm）与红光（625±15 nm）刺激，测定瞳孔收缩百分比（PPC）、最大收缩速度（MCV）、MCV潜伏期（LMCV）及中央与周边PPC反应比值（QPPC值）。 结果：昏暗光适应下，各视野位置及光强条件下红光刺激引发的PPC均值均低于蓝光刺激，且QPPC值在测试光强范围内红光刺激高于蓝光刺激；蓝光背景条件下，周边视野红蓝光刺激的瞳孔反应基本相当。蓝光与红光刺激在各视野位置的LMCV均保持相对稳定。 结论：色觉瞳孔测量仪可评估不同视野区域视杆与视锥细胞对PLR的贡献。本文确定的两种感光细胞系统局部激活的最佳检测光强，可用于临床评估感光细胞健康状态。
关键词： 视杆细胞、视锥细胞、视野计检查、瞳孔光反射、色觉瞳孔视野计检查
更新于2025-09-23 15:23:52
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σ1受体缺失加速视网膜色素变性小鼠模型中光感受器细胞死亡
摘要： Sigma 1受体（Sig1R）是神经退行性疾?。òㄊ油ぜ膊。┑男滦椭瘟瓢械恪ig1R基因敲除小鼠会出现迟发性视网膜变性伴神经节细胞丢失，且该症状在应激状态下会加重。目前尚不清楚Sig1R是否对维持其他视网膜神经元起作用，本研究通过rd10小鼠（严重光感受器变性模型）对此进行了探究。 方法：采用野生型、rd10及rd10/Sig1R基因敲除小鼠进行视网膜电图（ERG）和频域光学相干断层扫描（SD-OCT），以评估原位视觉功能与结构。对显微成像的视网膜进行形态计量分析、视锥细胞免疫检测及胶质增生分析。从mRNA/蛋白水平评估氧化应激与内质网（ER）应激。 结果：P28时rd10/Sig1R基因敲除小鼠明视ERG反应显著弱于rd10小鼠（31±6 vs 56±7 μV），表明Sig1R缺失会加速视锥细胞丢失。P28时SD-OCT显示rd10/Sig1R基因敲除小鼠视网膜厚度仅为野生型的60%，显著薄于rd10小鼠的80%。形态计量分析揭示rd10/Sig1R基因敲除小鼠比rd10小鼠存在更严重的光感受器核丢失。P28和P35时，rd10/Sig1R基因敲除小鼠的光感受器数量分别比rd10小鼠减少35%和60%?；ㄉ乇昙堑氖幼断赴灾跎伲籸d10/Sig1R基因敲除小鼠的胶质增生显著加剧。P21时，rd10/Sig1R基因敲除小鼠的NRF2水平较rd10小鼠升高，下游抗氧化剂增加，提示存在氧化应激。P28时，rd10/Sig1R基因敲除小鼠的ER应激相关基因/蛋白（尤其是未折叠蛋白反应强效转录激活因子XBP1和促凋亡转录因子CHOP）较rd10小鼠显著上调。 结论：rd10/Sig1R基因敲除小鼠的光感受器变性加速且视锥功能更早衰退，凸显了Sig1R作为视网膜细胞存活调节因子的重要性。
关键词： 视锥细胞、视网膜神经保护、视杆细胞、视网膜变性、rd10小鼠、视网膜电图（ERG）
更新于2025-09-24 03:35:06
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早期年龄相关性黄斑变性中的暗适应减缓：双刺激揭示视杆与视锥功能异常
摘要： 早期年龄相关性黄斑变性（AMD）患者光漂白后视杆细胞视觉敏感度恢复速度减缓，而视锥细胞功能也可能存在异常。本文旨在通过测试不同刺激位置来探究视锥细胞功能及其与视杆细胞异常的关联。研究者在下方视野的3.08°和5.58°两个位置呈现刺激信号，将50例早期AMD患者的光漂白后暗适应（DA）曲线与15名同龄健康对照组的相应曲线进行对比。通过四个参数表征曲线特征：ct（视锥细胞阈值）、a（视锥向视杆功能转换点）、S2（第二段视杆介导成分斜率）及b（第二至第三段视杆介导成分转换点）。健康组与AMD组均呈现显著的位置效应——外周刺激较中心刺激具有更高的视锥阈值（P=0.001）、更陡峭的S2斜率（P<0.001）、更短的转换点a（P=0.004）及更短的转换点b（P=0.002）?；颊呤荩ㄓ绕涫莂和b参数）的高方差性解释了统计学上未出现组别×位置交互作用的原因。该数据为早期干性AMD中异常的视锥/视杆敏感度恢复机制提供了新视角，不同位置DA曲线的对比凸显了视锥细胞参与AMD潜在病理过程的证据，动态视觉功能测量对早期AMD具有特殊敏感性。
关键词： 视锥细胞、双定位、视杆细胞、暗适应
更新于2025-09-11 14:15:04
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在小鼠视网膜退行性疾病模型中，穆勒胶质细胞会吞噬死亡的感光细胞。
摘要： 色素性视网膜炎是一种毁灭性的致盲疾病，全球每4000人中就有1人受其影响。在该病症发展过程中，吞噬清除死亡感光细胞体具有保护作用——通过防止细胞碎片堆积造成额外视网膜损伤。但执行清除功能的细胞身份始终未明。我们利用色素性视网膜炎小鼠模型（RhoP23H/P23H），阐明了Müller胶质细胞对视杆细胞吞噬作用的机制：在视网膜退化早期，Müller胶质细胞会参与外核层全层濒死/死亡视杆细胞的吞噬，约50%的Müller细胞参与此过程，且其中超过90%的Müller吞噬体成熟为吞噬溶酶体。这些发现表明Müller胶质细胞是主要吞噬执行者。相比之下，巨噬细胞仅在感光细胞退化期间迁移至外核层内侧，仅参与有限数量濒死/死亡感光细胞的吞噬。健康野生型小鼠的视网膜中，Müller胶质细胞虽频率较低但仍会吞噬死亡视杆细胞体。综上，Müller胶质细胞的吞噬功能对正常及病理状态下的视网膜稳态维持与结构重组具有重要作用。
关键词： 色素性视网膜炎、吞噬作用、视杆细胞、视紫红质
更新于2025-09-10 09:29:36
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从视网膜前体细胞诱导出视杆细胞与视锥细胞特异性祖细胞
摘要： 在发育过程中，多能祖细胞会经历时间限制的分化，形成有丝分裂后视网膜细胞；然而，视网膜发生过程中发生的祖细胞分裂机制仍存在争议。通过克隆分析（谱系追踪和单细胞培养），我们确定了源自成体视网膜干细胞和胚胎神经视网膜前体的视杆与视锥谱系特异性祖细胞。?；撬岷褪踊扑岜恢っ髟谧嫦赴紫挡慵对缙谝灾噶钚院推紫迪拗菩苑绞阶饔茫痈上赴蟠胁痈讼拗菩宰嫦赴?。我们还发现了一种指令性但谱系非依赖性的机制，通过抑制多种分化信号通路来指定视锥限制性祖细胞。这些数据表明，外源信号在指导谱系决策以及最终在培养中产生命运受限的视杆或视锥光感受器祖细胞方面发挥关键作用。体内可能还有其他因素参与调控光感受器命运。
关键词： 视网膜，视杆细胞，视锥细胞，干细胞，祖细胞
更新于2025-09-09 09:28:46
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内源性荧光团实现灵长类动物眼睛的双光子成像
摘要： 对活体哺乳动物眼睛进行非侵入式双光子成像，可以揭示视网膜和视网膜色素上皮中的分子过程细节。视黄酯和全反式视黄醛缩合产物是存在于这些组织中的两类视黄醇荧光团。我们测量了猴眼和人眼中这两类视黄醇的含量，以验证双光子成像技术监测人眼视黄醇变化的潜力。
关键词： 灵长类视网膜、类视黄醇循环、双光子显微镜、视杆细胞、视锥细胞
更新于2025-09-09 09:28:46