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CRISPR/Cas9编辑的患者源性视网膜色素上皮细胞功能评估
摘要： 色素性视网膜炎是最常见的遗传性失明形式，可由多种导致相似表型的基因突变引起。具体而言，普遍表达的剪接因子蛋白突变已知会导致该病的常染色体显性遗传型，但这些突变的视网膜特异性病理机制尚不明确。我们利用携带PRPF8剪接因子错义突变的剪接因子型视网膜色素变性患者成纤维细胞，制备了三个患病和三个经CRISPR/Cas9校正的诱导多能干细胞(iPSC)克隆。通过定向分化将这些克隆分别诱导为视网膜色素上皮(RPE)细胞，并从基因/蛋白表达、顶底极性及吞噬能力等方面进行分析。结果表明：患者源及校正后的细胞均可生成RPE细胞，其体外形态与功能与野生型RPE细胞相似但不完全相同；功能上，这些RPE细胞建立顶底极性及吞噬光感受器外节段的能力与野生型细胞相当。这些数据提示：无论患病还是校正的患者源iPSC，都能分化出表型接近正常且吞噬功能无差异的RPE细胞——该结论与既往小鼠模型不同。现可利用这些RPE细胞建立与视网膜色素变性相关的"疾病类器官"研究系统。
关键词： 视网膜色素上皮细胞、CRISPR/Cas9、视网膜色素变性、PRPF8、诱导多能干细胞
更新于2025-09-23 15:23:52
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异鼠李素可预防H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激
摘要： 异鼠李素是槲皮素的3-O-甲基化代谢产物，具有抗氧化作用。但据我们所知，目前尚无研究关注异鼠李素对视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响及其潜在分子机制。因此，本研究旨在探讨异鼠李素对人RPE细胞氧化应激的潜在?；ぷ饔谩＝峁砻?，异鼠李素预处理显著提高了RPE细胞在氧化应激下的存活率。此外，异鼠李素预处理抑制了过氧化氢（H2O2）诱导的RPE细胞活性氧（ROS）生成和caspase-3活化。进一步研究发现，与单独H2O2处理的细胞相比，H2O2暴露的RPE细胞经异鼠李素预处理后，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和丝氨酸/苏氨酸激酶1（Akt）的磷酸化水平显著升高。综上，本研究证实异鼠李素能?；と薘PE细胞免受氧化应激诱导的细胞死亡，该效应与PI3K/Akt信号通路的激活相关。因此，异鼠李素可能成为预防年龄相关性黄斑变性的潜在抗氧化剂。
关键词： 年龄相关性黄斑变性、氧化应激、异鼠李素、视网膜色素上皮细胞
更新于2025-09-23 15:23:52
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一种类似斯塔加特病的黄斑营养不良（STGD3）转基因小鼠模型中视网膜色素上皮和光感受器的早期超微结构与功能缺陷
摘要： 目的：我们研究了表达突变型ELOVL4（导致Stargardt样疾病STGD3）的光感受器与视网膜色素上皮（RPE）在视网膜退变初期的相互作用。 方法：通过电子显微镜和视网膜电图（ERG），评估转基因ELOVL4（TG1-2系；TG）及野生型（WT）同窝小鼠的RPE和光感受器超微结构与功能。实验在P30（TG小鼠光感受器丢失前1个月）和P90（约30%视杆细胞丢失时点）进行。为阐明超微结构和功能结果的机制，我们对RPE细胞吞噬外节的关键蛋白进行了Western blotting和免疫组化分析。 结果：首先发现TG小鼠光感受器中内源性ELOVL4蛋白在突变蛋白存在时未发生错误定位。其次，在P30即观察到RPE毒性证据（早于任何光感受器丢失），P90时RPE细胞病理加重。此外，更多吞噬体滞留于RPE细胞顶端侧。视网膜下溶酶体沉积物对吞噬蛋白呈免疫阳性。光感受器（视杆）外节超微结构显示盘膜间距不规则的表面形态破坏。最后，通过ERG a波前沿（P30）和c波（P90）分别检测到视杆细胞和RPE功能障碍迹象。 结论：转基因小鼠光感受器中的人源突变ELOVL4导致早期外节盘膜病理改变和RPE细胞毒性。RPE细胞对这些异常盘膜的缺陷处理，最终可能引发外节截短、光感受器死亡及视力丧失。
关键词： 小鼠，外节段，斯塔加特样黄斑营养不良，光感受器，STGD3，吞噬作用，ELOVL4，视网膜色素上皮细胞
更新于2025-09-23 15:23:52
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全反式维甲酸通过磷脂酶C而非腺苷酸环化酶信号通路刺激视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2
摘要： 背景：通过研究（一）全反式维甲酸（ATRA）对人类视网膜色素上皮（RPE）表达和分泌转化生长因子（TGF）-β2的影响，以及（二）U73122（磷脂酶C抑制剂）和SQ22536（腺苷酸环化酶抑制剂）对ATRA诱导的人类RPE分泌TGF-β2的调节作用，我们试图阐释ATRA促进近视发展的信号通路。方法：用（一）ATRA（10 μM）、（二）U73122（5–40 μM）联合ATRA（10 μM）或（三）SQ22536（5–40 μM）联合ATRA（10 μM）处理RPE细胞系（D407）。对照组未作处理。在刺激2、4、8、16、24和48小时后检测TGF-β2的表达和分泌情况。结果：ATRA以时间依赖性方式增加胞质内TGF-β2（p < 0.001）。ATRA也以时间依赖性方式增加上清液中TGF-β2蛋白（p < 0.001）。U73122（5至40 μM范围内）可抑制ATRA诱导的TGF-β2分泌（p < 0.001），且40 μM U73122能完全阻断10 μM ATRA的上调效应。但SQ22536（5至40 μM范围内）对ATRA诱导的TGF-β2分泌无影响（p > 0.05）。结论：在RPE细胞中，ATRA通过磷脂酶C信号通路而非腺苷酸环化酶信号通路刺激TGF-β2分泌。U73122可能抑制ATRA对近视发展的促进作用。
关键词： 视网膜色素上皮细胞，全反式维甲酸，SQ22536，转化生长因子-β2，U73122
更新于2025-09-23 13:43:41
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生长抑制因子4影响视网膜色素上皮细胞中缺氧诱导的迁移和血管生成调控
摘要： 生长抑制因子4（ING4）是一种潜在的肿瘤抑制因子，与细胞迁移和血管生成相关。然而，其对糖尿病视网膜病变（DR）的影响尚未阐明。本研究旨在评估正常大鼠和糖尿病大鼠中ING4的表达情况，并阐明其对缺氧诱导的人视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞功能障碍的影响。通过腹腔注射链脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型，分别在4、8或12周后处死大鼠。采用蛋白质印迹分析、逆转录定量实时聚合酶链反应（RT-qPCR）和免疫组织化学检测视网膜组织中ING4的表达。在转染ING4过表达慢病毒载体或小干扰RNA（siRNA）后，通过划痕实验和Transwell实验检测缺氧条件下ARPE-19细胞的迁移能力。通过评估人视网膜内皮细胞（HREC）毛细血管管腔形成来检测ARPE-19细胞条件培养基（CM）的促血管生成作用。此外，通过蛋白质印迹分析和RT-qPCR研究ING4、特异性蛋白1（Sp1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9和血管内皮生长因子A（VEGF-A）参与的信号通路。研究发现，糖尿病大鼠视网膜组织中ING4表达显著降低。沉默ING4加重了缺氧诱导的ARPE-19细胞迁移。缺氧条件下转染ING4 siRNA的ARPE-19细胞收集的CM促进了HREC的血管生成。这些效应被ING4过表达逆转。此外，在缺氧处理的ARPE-19细胞中，ING4以Sp1依赖的方式抑制MMP-2、MMP-9和VEGF-A的表达。总体而言，我们的研究结果为ING4对ARPE-19细胞缺氧诱导的迁移和血管生成调控的?；ぷ饔锰峁┝擞屑壑档幕萍??；指碔NG4可能是治疗DR的新策略。
关键词： 迁移、血管生成、糖尿病视网膜病变、视网膜色素上皮细胞、缺氧、生长抑制因子4
更新于2025-09-23 22:57:46
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膜型卷曲相关蛋白调控脂质组与转录以维持感光细胞功能
摘要： 光感受器（PRC）膜结构和基因调控的分子决策者对理解视觉及致盲性视网膜退化至关重要。通过使用会引发PRC退化的Mfrprd6小鼠模型，我们发现膜型卷曲相关蛋白（MFRP）以类似于脂联素受体1（AdipoR1）的方式参与二十二碳六烯酸（DHA，22:6）的富集过程。非靶向成像质谱分析显示，Adipor1?/?和Mfrprd6视网膜中含22:6及超长链多不饱和脂肪酸（VLC-PUFAs）的磷脂呈现细胞特异性减少。两种突变体均表现出促炎信号通路的基因表达增强，而PRC功能相关编码蛋白的基因表达降低。由此我们提出：这两种蛋白对视网膜脂质组膜结构、视觉功能维持以及视网膜退行性疾病早期病理机制的理解均具有关键作用。
关键词： 视网膜色素上皮细胞、视网膜变性、Adipor1、炎症信号传导、极长链多不饱和脂肪酸、基质辅助激光解吸电离成像质谱法（MALDI IMS）
更新于2025-09-12 10:27:22
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管花肉苁蓉提取物对低亮度蓝光诱导的退行性视网膜病变的新保护作用
摘要： 背景/目的：蓝光发光二极管（BLL）诱导的光毒性在眼部疾病中起重要作用，可导致人视网膜色素上皮（RPE）细胞发生视网膜变性和凋亡。管花肉苁蓉提取物（CTE）是一种具有多种保护作用的中药，但关于其眼部?；ぷ饔玫难芯拷仙?。本研究通过体内外实验探讨了CTE对BLL诱导凋亡的作用机制。 方法：体外实验采用RPE细胞，通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑法检测细胞活力，采用蛋白质印迹分析和免疫荧光染色检测凋亡相关蛋白表达。以棕色挪威大鼠为模型进行体内实验，观察市售BLL暴露的影响。采用苏木精和伊红染色、末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）及蛋白质印迹分析评估视网膜形态学改变。 结果：CTE显著抑制过氧化氢、叔丁基过氧化氢、叠氮钠及BLL诱导的RPE损伤。免疫荧光染色显示，CTE通过灭活凋亡通路，降低BLL暴露后裂解的caspase-3等凋亡标志物表达及TUNEL染色阳性率。此外，CTE还能抑制BLL诱导的RPE细胞中c-Jun N-末端激酶、细胞外信号调节激酶1/2和p38的磷酸化。体内实验表明，口服CTE可逆转60天周期性BLL暴露导致的视网膜厚度减小，并减少棕色挪威大鼠模型中TUNEL阳性细胞数量。 结论：CTE是预防BLL诱导光毒性的潜在药物。
关键词： 管花肉苁蓉提取物、蓝光、视网膜色素上皮细胞、凋亡
更新于2025-09-10 09:29:36
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敲低FOXO6可抑制高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化应激和凋亡
摘要： 视网膜色素上皮细胞中的氧化应激和凋亡参与了糖尿病视网膜病变（DR）的发病机制。叉头框O类6（FOXO6）是FOXO家族成员，可调控糖尿病诱导的氧化应激。然而，FOXO6在DR中的作用尚未明确。本研究旨在探讨FOXO6对高糖（HG）诱导的ARPE-19细胞氧化应激和凋亡的影响。结果显示，FOXO6在DR患者临床玻璃体样本及HG诱导的ARPE-19细胞中过表达。通过靶向FOXO6的小干扰RNA（si-FOXO6）敲低FOXO6，可减轻HG诱导的活性氧和丙二醛生成，并抑制超氧化物歧化酶活性下降。si-FOXO6转染降低了HG诱导的ARPE-19细胞凋亡率。HG刺激导致的bax表达上调和bcl-2表达下调被si-FOXO6逆转。此外，敲低FOXO6增强了HG刺激的ARPE-19细胞中Akt/Nrf2通路的激活。综上，抑制FOXO6可通过部分激活Akt/Nrf2通路，?；RPE-19细胞免受HG诱导的氧化应激和凋亡。
关键词： Akt/Nrf2通路、氧化应激、视网膜色素上皮细胞、叉头框O6类转录因子、糖尿病视网膜病变、细胞凋亡
更新于2025-09-04 15:30:14