研究目的
评估糖尿病大鼠中ING4的表达情况，并阐明其对ARPE-19细胞缺氧诱导功能障碍（包括迁移和血管生成调控）的影响。
研究成果
糖尿病大鼠视网膜中ING4表达降低。ING4通过负调控Sp1依赖性的MMP-2、MMP-9和VEGF-A表达，抑制ARPE-19细胞缺氧诱导的迁移和血管生成?；指碔NG4表达可能成为糖尿病视网膜病变的新型治疗策略。
研究不足
所有功能研究均在单一细胞系（ARPE-19）中进行，可能无法解释细胞特异性效应。需要额外的体内和体外实验来验证这些发现。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用链脲佐菌素注射诱导的1型糖尿病大鼠模型。通过蛋白质印迹、RT-qPCR和免疫组化检测ING4表达，功能实验包括伤口愈合、跨膜迁移和小管形成实验，探究了涉及ING4、Sp1、MMP-2、MMP-9和VEGF-A的信号通路。
2：SpMMP-MMP-9和VEGF-A的信号通路。 样本选择与数据来源：
2. 样本选择与数据来源：使用雄性Sprague-Dawley大鼠（约200克；8周龄）。ARPE-19细胞（购自ATCC）和HRECs（购自Angio-Proteomie）在常氧和缺氧条件下培养。
3：实验设备与材料清单：
设备包括用于缺氧的AnaeroPack、倒置显微镜（Olympus BX51）、RT-qPCR用的LightCycler 480、NanoDrop 2000分光光度计，以及慢病毒载体、siRNA、抗体和Matrigel等试剂盒与试剂。
4：1）、RT-qPCR用的LightCycler NanoDrop 2000分光光度计，以及慢病毒载体、siRNA、抗体和Matrigel等试剂盒与试剂。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：大鼠注射链脲佐菌素或缓冲液，监测血糖，在4、8或12周处死并取视网膜组织分析。细胞转染ING4过表达或siRNA后暴露于缺氧环境，进行迁移和血管生成实验，测定蛋白和mRNA水平。
5：8或12周处死并取视网膜组织分析。细胞转染ING4过表达或siRNA后暴露于缺氧环境，进行迁移和血管生成实验，测定蛋白和mRNA水平。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：使用Prism 7.0软件进行统计分析，采用单因素方差分析和Student's t检验，数据以均值±标准差表示。
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NanoDrop 2000 Spectrophotometer
2000
Thermo Fisher Scientific
Measuring nucleic acid concentration and purity
-
Inverted microscope
BX51
Olympus
Imaging cells in wound healing and transwell assays
-
Transwell inserts
3422
Corning
For cell migration assays
-
Accu-Chek blood glucometer
Roche Diabetes Care
Measuring blood glucose levels in rats
-
ARPE-19 cell line
American Type Culture Collection (ATCC)
Human retinal pigment epithelial cell line used for experiments
-
HRECs
Angio-Proteomie
Primary human retinal endothelial cells used for tube formation assays
-
DMEM/F-12 medium
HyClone
Cell culture medium for ARPE-19 cells
-
Fetal bovine serum
Gibco, Thermo Fisher Scientific
Supplement for cell culture media
-
Endothelial cell medium
ScienCell
Cell culture medium for HRECs
-
AnaeroPack
Mitsubishi Gas Chemical
Creating hypoxic conditions in cell culture
-
Lentivirus for ING4 overexpression
GV492
GeneChem
Transducing ARPE-19 cells to overexpress ING4
-
siRNA for ING4 and Sp1
GenePharma
Knocking down ING4 and Sp1 expression in cells
-
Lipofectamine RNAiMAX
Invitrogen
Transfection reagent for siRNA delivery
-
Eastep Super Total RNA Extraction Kit
Promega
Extracting total RNA from tissues and cells
-
RT Reagent Kit
TaKaRa
Reverse transcribing RNA to cDNA
-
FastStart Universal SYBR Green Master Mix
Roche Diagnostics
For quantitative PCR reactions
-
LightCycler 480
480
Roche Diagnostics
Performing quantitative real-time PCR
-
Western blot antibodies
Abcam, Santa Cruz Biotechnology, CMC-TAG
Detecting specific proteins in western blot analysis
-
Bicinchoninic Acid Protein Assay Kit
Beyotime
Measuring protein concentration
-
Matrigel Matrix
356230
BD Biosciences
For tube formation assays with HRECs
-
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