用于开发mRNA帽结合蛋白结合活性与水解活性检测的荧光开启探针

摘要： m7G帽是所有真核生物mRNA 5'端独特的核苷酸结构。该帽结构与多种细胞蛋白特异性相互作用，参与对细胞生长和功能至关重要的生物过程。为研究重要帽识别蛋白，我们通过末端磷酸（酯）基团合成了带荧光标记的m7G核苷酸，并探究其结合蛋白或酶切时发射特性的变化。仅芘标记化合物表现出灵敏的"点亮型"探针特性：芘标记的m7GTP类似物与真核翻译起始因子4E（eIF4E）结合时荧光增强达8倍，被脱帽清除酶（DcpS）切割时增强超过30倍。这些发现为开发结合活性及水解活性检测方法奠定了基础。通过已表征的eIF4E配体库和DcpS抑制剂库验证了检测方法的实用性。该DcpS检测法还用于研究HeLa和HEK细胞胞质提取物中内源酶的水解活性及抑制作用。