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荧光标记抗人CD4单克隆抗体与人淋巴细胞上CD4受体结合的模型

DOI：10.6028/jres.123.022 期刊：Journal of Research of the National Institute of Standards and Technology 出版年份：2018 更新时间：2025-09-12 10:27:22
摘要： CD4糖蛋白是T细胞受体复合物的组成部分，在人体免疫反应中发挥重要作用。本手稿描述了荧光标记的抗人CD4单克隆抗体（mAb；SK3克隆）与人外周血单个核细胞（PBMC）表面CD4受体结合的测量与建模过程。实验使用的CD4 mAb异硫氰酸荧光素（FITC）和CD4 mAb别藻蓝蛋白（APC）偶联物均购自商业渠道。研究设置了四种结合条件，每种条件采用相同的PBMC样本但搭配不同的CD4 mAb偶联物。各条件下PBMC样本在含梯度浓度CD4 mAb标记物的溶液中孵育30分钟，随后重悬于PBS缓冲液并通过流式细胞仪测定标记细胞群的平均荧光强度（MFI）。研究建立了模型来估算PBMC表面CD4受体与CD4 mAb标记物偶联物的平衡结合浓度，通过模型与实测MFI数据的最佳拟合及已知的PBMC表面CD4受体数量，获得了一组参数。APC和FITC标记的CD4 mAb偶联物分别需要采用二价和单价结合模式，这表明抗体结合依赖于标记物尺寸——该发现对定量流式细胞术具有重要启示意义。本研究支持了美国国家标准与技术研究院开发定量流式细胞测量技术的计划。
作者： Lili Wang，Adolfas K. Gaigalas，Paul C. DeRose
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研究概述 实验方案 设备清单

研究目的

研究荧光标记的抗人CD4单克隆抗体与人外周血单个核细胞（PBMC）上CD4受体的结合特性，以支持定量流式细胞术测量的开发。

研究成果

该研究成功模拟了荧光标记的CD4单克隆抗体与外周血单个核细胞上CD4受体的结合过程，揭示这种结合取决于标记物的大?。‵ITC为单价，APC为二价）。这对定量流式细胞术具有重要启示意义，支持建立标准化测量方法。未来研究需协调流式细胞仪测量与荧光光谱数据以实现更精确的定量分析。

研究不足

该研究假设了顺序结合过程，并未充分考虑所有潜在混杂效应（如非特异性结合及标记溶液中未标记单克隆抗体的存在）。模型的准确性取决于解离常数的正确估算，以及基于标记物大小对单价或二价结合的假设。

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