研究目的
本研究旨在开发一种血管动蛋白(AMOT)表达的PET成像剂,AMOT是缺血后功能性组织再生的潜在生物标志物。
研究成果
本研究首次报道了小鼠后肢缺血后AMOT表达早期且持续升高的现象。我们研发了一种靶向AMOT的显像剂68Ga-sCD146,并通过microPET成像显示其在缺血后肢中具有长达21天的特异性摄取。早期缺血后PET信号与延迟的血流灌注恢复及临床预后相关,由此推测68Ga-sCD146有望成为评估组织血管生成的理想放射性示踪剂。
研究不足
该研究是在小鼠模型上进行的,尚需在人体受试者中进一步验证。68Ga-sCD146 PET成像在临床环境中的特异性和敏感性仍有待评估。
1:实验设计与方法选择:
通过结扎并切除小鼠右股动脉诱导后肢缺血,在术后30天内评估临床评分和肢体灌注情况。采用组织学和蛋白质印迹法检测AMOT表达。设计、合成AMOT配体sCD146的NODAGA偶联物并用镓-68进行放射性标记。在缺血后第1至30天进行68Ga-sCD146微PET/CT成像。通过放射自显影评估68Ga-sCD146对AMOT的特异性。
2:样本选择与数据来源:
使用7周龄雌性BALB/c小鼠。
3:实验设备与材料清单:
激光多普勒灌注成像仪(Perimed)、NanoscanPET/CT相机(Mediso)、Amicon Ultra-0.5 3 kDa离心过滤装置(Millipore)、NuPAGE十二烷基硫酸锂样品缓冲液(Invitrogen)、NuPAGE样品还原剂(Invitrogen)、Novex Bis-Tris凝胶(Invitrogen)、硝酸纤维素膜(Invitrogen)、抗AMOT p130或p80抗体(Abcam ab85143)、抗GAPDH抗体(Abcam ab9484)、过氧化物酶偶联二抗(Thermo Scientific 31460)、ECL底物(Pierce)。
4:5 3 kDa离心过滤装置(Millipore)、NuPAGE十二烷基硫酸锂样品缓冲液(Invitrogen)、NuPAGE样品还原剂(Invitrogen)、Novex Bis-Tris凝胶(Invitrogen)、硝酸纤维素膜(Invitrogen)、抗AMOT p130或p80抗体(Abcam ab85143)、抗GAPDH抗体(Abcam ab9484)、过氧化物酶偶联二抗(Thermo Scientific 31460)、ECL底物(Pierce)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:诱导后肢缺血,评估临床评分和肢体灌注情况。通过组织学和蛋白质印迹法检测AMOT表达。合成sCD146的NODAGA偶联物并用镓-68进行放射性标记。进行68Ga-sCD146微PET/CT成像。
5:数据分析方法:
使用InterviewFusion软件(Mediso)对衰减和衰变校正后的PET图像进行定量感兴趣区域(ROI)分析以评估PET信号。
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获取完整内容-
peroxidase-coupled secondary antibodies
31460
Thermo Scientific
Used in Western blot analysis.
-
LASER-Doppler perfusion imaging
Perimed
Assess revascularisation from day 1 to day 30 after surgery.
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NanoscanPET/CT camera
Mediso
MicroPET imaging sessions were performed under 2% isoflurane anaesthesia.
-
Amicon Ultra-0.5 3 kDa centrifugal filter
Millipore
Purification of sCD146 solution.
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NuPAGE lithium dodecylsulfate sample buffer
Invitrogen
Used in Western blot analysis.
-
NuPAGE sample reducing agent
Invitrogen
Used in Western blot analysis.
-
Novex Bis-Tris gels
Invitrogen
Used in Western blot analysis.
-
nitrocellulose membranes
Invitrogen
Used in Western blot analysis.
-
anti-AMOT p130 or p80 antibody
ab85143
Abcam
Used in Western blot analysis.
-
anti-GAPDH
ab9484
Abcam
Used in Western blot analysis.
-
ECL substrate
Pierce
Used in Western blot analysis.
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