研究目的
提供一种通过结合电生理学和急性分离视神经的双光子成像技术,来研究表达基因编码传感器的电活性有髓轴突的方法。
研究成果
玻璃体内注射携带基因编码传感器的AAV载体是一种快速可靠的方法,可在视神经轴突中驱动功能性传感器表达。将电生理学与双光子成像相结合,能够研究轴突代谢物动态变化,为探究少突胶质细胞支持功能及轴突能量稳态提供有力工具。
研究不足
该研究仅限于视神经模型,可能无法直接应用于其他白质纤维束。该技术需要专门的设备以及双光子成像和电生理学方面的专业知识。
1:实验设计与方法选择:
本研究结合电生理学与急性分离视神经的双光子成像技术,研究表达基因编码传感器的电活性有髓轴突。
2:样本选择与数据来源:
使用野生型小鼠(C57BL/6J)和转基因小鼠B6-Tg(Thy1.2-ATeam1.03YEMK)AJhi的视神经。
3:2-ATeam03YEMK)AJhi的视神经。 实验设备与材料清单:
3. 实验设备与材料清单:采用定制双光子激光扫描显微镜、Ti:蓝宝石激光器、25倍水浸物镜、GaAsP光电倍增??榧按碳し⑸?。
4:实验流程与操作步骤:
对小鼠进行玻璃体内AAV注射,注射后3-6周制备视神经用于成像实验,结合电神经刺激与复合动作电位(CAPs)记录进行双光子成像。
5:数据分析方法:
使用ImageJ提取各通道强度,并计算每个采集时间点的mVenus/mseCFP比值。
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