研究目的
开发用于从活细胞中以单分子精度进行空间控制和样本提取的微创纳米镊子,实现对活细胞的实时分析与干扰。
研究成果
开发的纳米镊子能够以单分子精度微创提取细胞内分子,为活细胞的实时分析提供了强大工具。该技术弥合了单分子/细胞器操控与细胞生物学之间的鸿沟,有望推动对细胞异质性和动态变化的理解取得进展。
研究不足
该研究表明纳米镊子在单细胞活检方面具有潜力,但指出需要进一步优化以实现更广泛应用,包括处理低拷贝数mRNA以及最大限度减少提取过程中潜在的细胞损伤。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用由两个紧密间隔的电极组成的纳米镊子,通过介电泳力捕获DNA和蛋白质。研究方法包括纳米镊子的制备、表征及其在单细胞活检中的应用。
2:样本选择与数据来源:
使用人骨肉瘤细胞(U2OS)和原代人肺动脉内皮细胞(HPAECs)进行核酸提取,采用原代啮齿类海马神经元提取线粒体。
3:实验设备与材料清单:
用于纳米镊子制备的双管石英毛细管、DNA标记染料YOYO-1、RNA染色剂SYTO RNASelect以及线粒体可视化染料MitoTracker Green。
4:RNA染色剂SYTO RNASelect以及线粒体可视化染料MitoTracker Green。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:将纳米镊子插入细胞并施加交流电压进行捕获,随后通过qPCR和测序分析提取物。
5:数据分析方法:
采用荧光显微镜观察、qPCR扩增及测序验证提取DNA的完整性。
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获取完整内容-
nanotweezers
Minimally invasive extraction of samples from living cells with single-molecule precision.
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YOYO-1
Molecular Probes
Fluorescent labelling of DNA.
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SYTO RNASelect
Molecular Probes
RNA staining.
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MitoTracker Green
Thermo Fisher
Mitochondrion visualization.
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