研究目的
研究融合蛋白在利用荧光寿命成像显微镜（FLIM）检测活细胞中纤维形成研究中的适用性。
研究成果
研究得出结论：FLIM技术适用于检测细胞内纤维形成，并可用于筛选抑制IAPP纤维生成的试剂，其中SF-IAPP可作为研究细胞内IAPP聚集的合适模型。
研究不足
该研究的局限性在于荧光寿命测量对外部条件的敏感性，以及需要在相同环境中研究蛋白质时进行电泳分离的需求。
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时代变迁：淀粉样生成性SF-IAPP融合蛋白的荧光寿命分析
DOI：10.1016/j.jsb.2018.11.006
期刊：Journal of Structural Biology
出版年份：2018
更新时间：2025-09-09 09:28:46
摘要：
在多种构象疾病中，会出现携带非天然构象的蛋白质在细胞内积聚的现象。寻找能够阻碍有毒蛋白质聚集体和纤维形成的化合物是一项紧迫任务。现有的纤维检测荧光方法难以实现简单的实时观测。我们拟采用目标蛋白与绿色荧光蛋白融合技术及荧光寿命测量法来实现这一目的。所分析的重组蛋白由大肠杆菌生产，通过质谱技术鉴定其一级结构及翻译后修饰。利用荧光寿命成像显微镜（FLIM）研究了超折叠绿色荧光蛋白（SF）与胰岛淀粉样多肽融合蛋白（SF-IAPP）在聚丙烯酰胺凝胶中的荧光寿命。结果表明，在此条件下凝胶中SF的平均荧光寿命与SF-IAPP单体略有差异。SF-IAPP未丧失形成类淀粉样纤维的能力。相同条件下（聚丙烯酰胺凝胶中），SF与SF-IAPP单体的荧光时间特征相似，而SF-IAPP在纤维状态下的平均荧光寿命显著降低。我们建议在构象疾病细胞模型研究中，应用FLIM技术测量融合蛋白（致淀粉样变蛋白-SF）的平均荧光寿命。
作者：
Olga I Antimonova，Dmitry V Lebedev，Yana A Zabrodskaya，Natalia A Grudinina，Andrey L Timkovsky，Edward Ramsay，Michael M Shavlovsky，Vladimir V Egorov
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