研究目的
通过在同一小鼠离体主动脉制备中检测所有参数，以证明血管功能/功能障碍、脂质状态与内皮细胞皮质硬度之间的直接联系。
研究成果
该研究证实了ApoE/LDLR-/-小鼠中内皮功能障碍表型、细胞内脂质增加及皮质硬度升高之间存在直接关联。拉曼光谱与原子力显微镜联用技术提供了主动脉外层内皮的详细信息，揭示了细胞内脂质含量与皮质纳米力学特性之间的相互依赖关系——这种关系促进了内皮功能障碍和心血管疾病的发展。
研究不足
该研究仅限于离体样本制备，且在原子力显微镜测量中准确定位被探测细胞区域具有挑战性。由于拉曼光谱中胆固醇特异性标记带较弱，该研究也未对胆固醇含量进行分析。
1：实验设计与方法选择：
采用拉曼光谱与原子力显微镜（AFM）联用技术，在离体主动脉制备样本的同一区域同步分析活体内皮细胞的生化特性与纳米力学性质。
2：样本选择与数据来源：
使用6月龄ApoE/LDLR-/-基因敲除小鼠与野生型（WT）小鼠的主动脉组织。
3：实验设备与材料清单：
共聚焦拉曼成像系统（德国WITec alpha 300）、原子力显微镜（德国WITec alpha 300）、镀金背衬软质三角悬臂探针及直径10微米的聚苯乙烯球形针尖（美国Novascan）。
4：0）、原子力显微镜（德国WITec alpha 300）、镀金背衬软质三角悬臂探针及直径10微米的聚苯乙烯球形针尖（美国Novascan）。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：在液体环境中进行拉曼成像与AFM测量，对离体主动脉外植体的原位内皮细胞实施纳米压痕检测。
5：数据分析方法：
拉曼积分强度通过OPUS 5软件计算，其余参数使用OriginPro处理；采用双样本t检验或Tukey检验（拉曼数据）、双样本t检验或Mann-Whitney检验（AFM数据）、单侧非配对t检验（EPR数据）。
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Confocal Raman Imaging system
WITec alpha 300
WITec
Used for Raman imaging to analyze the biochemical properties of endothelial cells.
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Atomic Force Microscopy
WITec alpha 300
WITec
Used for AFM nanoindentation measurements to analyze the nanomechanical properties of endothelial cells.
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Leica CM1920 automatic cryostat
CM1920
Leica
Used for cutting OCT-frozen rings from the thoracic aorta into 10 μm-thick cross-sections.
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AxioCam HRm digital monochromatic camera
HRm
Carl Zeiss
Used for acquiring images of immunohistochemical stainings.
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AxioObserver.D1 inverted fluorescent microscope
D1
Carl Zeiss
Used for acquiring images of immunohistochemical stainings.
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X-band EPR spectrometer
EMX Plus
Bruker
Used for EPR-based measurements of NO produced by ApoE/LDLR-/- and WT aorta.
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