研究目的
为评估色氨酸氧化对两种单克隆抗体亚型的构象及功能影响，这对于确定结构-功能关系以及在蛋白治疗药物开发过程中建立适当的分析控制策略至关重要。
研究成果
单克隆抗体互补决定区（CDRs）中色氨酸的氧化会显著破坏抗原结合能力，并改变可变结构域的构象。色氨酸氧化引发的化学修饰可能导致单抗产生不良物理变化，如聚集倾向增加和效价降低。在单抗工艺开发过程中，应密切监测CDR色氨酸的氧化情况。
研究不足
该研究聚焦于色氨酸氧化对抗体药物偶联物构象及抗原结合的影响，但未探究柔韧性增加与蛋白质稳定性之间的关联——这可能是色氨酸氧化引发的长期效应。
1：实验设计与方法选择：
在游离甲硫氨酸（Met）存在下，通过2,2'-偶氮双(2-脒基丙烷)二盐酸盐（AAPH）处理诱导选择性色氨酸氧化。采用氢氘交换质谱（HDX-MS）分析天然与化学氧化单抗的构象变化，利用表面等离子共振（SPR）技术检测抗原-抗体结合特性。
2：样本选择与数据来源：
IgG1单抗（mAb1）和IgG4单抗（mAb4）由百时美施贵宝公司生产，表达于中国仓鼠卵巢（CHO）细胞并通过标准色谱步骤纯化。
3：实验设备与材料清单：
LC-MS级水、LC-MS级乙腈、8 M盐酸胍、优级三(2-羧乙基)膦盐酸盐（TCEP-HCl）、LC-MS级甲酸、测序级胰蛋白酶、人源Fab捕获试剂盒、CM5传感芯片、HBS-EP+运行缓冲液及胺偶联试剂盒。
4：实验流程与操作规范：
样品避光室温孵育，通过配方缓冲液置换终止氧化反应。
5：数据分析方法：
基于非氘代蛋白酶解物的HPLC分离进行肽段鉴定，采用MSE技术采集数据，使用ProteinLynx Global Server 3.0软件分析MSE数据。
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LC-MS grade water
Honeywell
Used in the preparation of samples for LC-MS analysis.
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LC-MS grade acetonitrile
J.T. Baker
Used as a solvent in LC-MS analysis.
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8 M Guanidine-HCl
Thermo Scientific Pierce
Used for protein denaturation.
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premium grade TCEP-HCl
Thermo Scientific Pierce
Used for reducing disulfide bonds in proteins.
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LC-MS grade formic acid
Thermo Scientific Pierce
Used as a mobile phase additive in LC-MS analysis.
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sequencing grade trypsin
Promega
Used for protein digestion in peptide mapping.
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Human Fab capture kit
GE Healthcare Life Sciences
Used for capturing human Fab fragments in SPR analysis.
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CM5 Sensor Chip
GE Healthcare Life Sciences
Used as the sensor surface in SPR analysis.
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HBS-EP+ running buffer
GE Healthcare Life Sciences
Used as the running buffer in SPR analysis.
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amine coupling kit
GE Healthcare Life Sciences
Used for immobilizing ligands on the sensor chip in SPR analysis.
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