研究目的
研究金属离子诱导的DNA模板银纳米簇(DNA-AgNCs)荧光增强现象,并开发一种无标记的端粒酶活性检测传感平台。
研究成果
该研究表明,金属离子能显著增强DNA-银纳米簇的荧光强度,其效果取决于DNA序列与结构。研究成功将其应用于开发一种高灵敏度、无标记的端粒酶活性检测传感平台,显示出与商业方法高度一致的高灵敏度。该发现拓展了金属离子在DNA-银纳米簇合成中的应用,并为生物分析提供了新策略。
研究不足
荧光增强效果取决于特定的DNA序列和结构,这可能会限制其普适性。该方法需要优化金属离子浓度,且可能受环境因素影响。潜在的优化方向包括提高稳定性并缩短制备时间。
1:实验设计与方法选择:
研究涉及设计DNA序列(单链DNA和发夹DNA)以模板化银纳米簇,探索不同金属离子对荧光增强的影响,并将其应用于通过分子信标(MB)系统检测端粒酶活性。理论模型包括DNA二级结构和金属离子相互作用的作用。
2:样本选择与数据来源:
合成了具有不同胞嘧啶含量和结构的DNA序列。使用端粒酶标准品和细胞提取物(如HepG2、A549、HeLa、CCC-HPF-1、CCC-HEL-1)作为端粒酶活性的来源。
3:AHeLa、CCC-HPF-CCC-HEL-1)作为端粒酶活性的来源。 实验设备与材料清单:
3. 实验设备与材料清单:DNA寡核苷酸、硝酸银、硼氢化钠、磷酸盐缓冲液(PB1、PB2)、乙酸铵缓冲液、dNTPs、端粒酶ELISA试剂盒、紫外-可见分光光度计(岛津UV-2450)、荧光分光光度计(岛津FR-6000)、荧光寿命光谱仪(爱丁堡仪器FLS980)、圆二色光谱仪(应用光物理Chirascan)、透射电镜(JEOL 2100F)。
4:PB2)、乙酸铵缓冲液、dNTPs、端粒酶ELISA试剂盒、紫外-可见分光光度计(岛津UV-2450)、荧光分光光度计(岛津FR-6000)、荧光寿命光谱仪(爱丁堡仪器FLS980)、圆二色光谱仪(应用光物理Chirascan)、透射电镜(JEOL 2100F)。 实验步骤与操作流程:
4. 实验步骤与操作流程:将DNA模板与缓冲液混合,加热后冷却,然后加入硝酸银和硼氢化钠合成银纳米簇。对于端粒酶检测,将分子信标与模板DNA、端粒酶和dNTPs孵育,随后合成银纳米簇并在特定时间后测量荧光。
5:数据分析方法:
测量荧光强度并将其与端粒酶活性相关联。使用线性回归进行校准曲线。统计分析包括检测限计算(3σ/k)。
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UV-vis spectrometer
UV-2450
Shimadzu
Collecting UV-vis spectra of AgNCs to analyze absorption properties.
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Fluorescence spectrophotometer
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Measuring fluorescence spectra of DNA-AgNCs to assess fluorescence intensity and enhancement.
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Taking high-resolution TEM images to analyze the size and dispersion of AgNCs.
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Circular Dichroism Spectrometer
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Applied Photophysics
Collecting CD spectra to investigate DNA secondary structures and changes induced by metal ions.
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Providing deionized water with high purity for experimental preparations.
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Used as a commercial method to compare and validate telomerase activity detection results.
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