研究目的
比较潜在药理替代品与核黄素光化学角膜交联剂的细胞毒性。
研究成果
不同交联剂之间的细胞毒性存在显著差异，其中单硝基醇和甘油醛的毒性最低，而戊二醛、多聚甲醛、京尼平和溴硝醇的毒性最高。平衡交联效能与细胞毒性对于开发安全的治疗剂至关重要。未来研究应探索体内应用并优化化合物，在保持交联效果的同时尽量降低毒性。
研究不足
该研究仅限于体外细胞培养模型，可能无法完全复现体内条件。细胞反应和试剂制备（如戊二醛与多聚甲醛的聚合）的差异可能影响结果。毒性阈值未考虑细胞膜与细胞外基质蛋白间反应性的差异。部分化合物的半数致死量（LD50）和遗传毒性数据尚不完整。
1：实验设计与方法选择：
本研究使用四种细胞系比较了九种化学交联剂，以评估毒性阈值。采用台盼蓝拒染法测定不同浓度试剂处理后的细胞存活率。
2：样本选择与数据来源：
使用的四种细胞系包括：永生化人角膜上皮细胞、人皮肤成纤维细胞、原代牛角膜内皮细胞和永生化人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）。细胞在标准条件下使用特定培养基培养。
3：实验设备与材料清单：
化学试剂包括2-硝基乙醇、2-硝基-1-丙醇、2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇（溴硝醇）、京尼平、L-甘油醛、2-甲基-2-硝基-1,3-丙二醇、2-羟甲基-2-硝基-1,3-丙二醇、多聚甲醛和戊二醛，供应商包括Sigma-Aldrich、东京化成工业和电子显微镜科学公司。细胞培养设备包含24孔板、培养箱和倒置显微镜（Fisher Scientific货号12-560-45）。
4：实验流程与操作步骤：
将细胞接种于24孔板，以0.001 mM至10 mM浓度暴露于交联剂24小时，随后在新鲜培养基中恢复48小时?；指春笥锰ㄅ卫度旧?至60分钟，清洗后通过显微镜观察评估细胞存活率和固定状态。
5：001 mM至10 mM浓度暴露于交联剂24小时，随后在新鲜培养基中恢复48小时?；指春笥锰ㄅ卫度旧?至60分钟，清洗后通过显微镜观察评估细胞存活率和固定状态。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：根据形态学观察和台盼蓝摄取情况将毒性分为五个等级（存活、部分死亡、死亡、死亡/消失、死亡/固定）。毒性阈值定义为所有细胞保持存活的最高浓度。
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trypan blue solution
0.4%
Gibco
Used as a vital dye to stain dead cells and assess cell viability.
-
epidermal growth factor
EGF
Sigma-Aldrich
Growth factor supplement for cell culture.
-
trypsin
0.25%
Gibco
Used to detach cells from culture flasks for subculturing.
-
culture flasks
25-cm2
NUNC-Thermo Fisher Scientific
Used for growing and maintaining cell cultures.
-
inverted microscope
Cat No. 12-560-45
Fisher Scientific
Used to examine cell morphology and staining characteristics after trypan blue staining.
-
24-well cell culture plates
Used for seeding cells and conducting toxicity tests.
-
Dulbecco’s modified Eagle’s medium
DMEM
Invitrogen
Culture medium for immortalized human corneal epithelial cells.
-
fetal bovine serum
Invitrogen
Supplement for cell culture media.
-
insulin
Sigma-Aldrich
Supplement for cell culture media.
-
penicillin and streptomycin
Invitrogen
Antibiotic supplement for cell culture to prevent contamination.
-
dermal cell basal medium
ATCC
Culture medium for human skin fibroblasts.
-
fibroblast growth kit
ATCC
Contains supplements for fibroblast culture, including growth factors and other components.
-
Ca2+-free Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline
DPBS
Invitrogen
Used for washing cells during culture and toxicity procedures.
-
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