研究目的
通过优化组织透明化方案ScaleSQ以减少组织肿胀并缩短重建时间，从而开发一种快速简便的电生理记录神经元细胞重建方法。
研究成果
IsoScaleSQ方法将神经元重建时间显著缩短至1-1.5小时，防止组织肿胀，在不扭曲亚细胞结构的前提下保持形态学完整性。该方法通过实现快速的事后形态学分析，提升了电生理实验的效率。
研究不足
该清除方法对白质和较厚切片（超过500微米）效果较差，且随着孵育时间延长会出现轻微肿胀?？赡懿⒉皇视糜谒心郧蜃橹嘈汀?/p>
1：实验设计与方法选择：
该研究通过添加NaCl防止组织肿胀，优化了ScaleSQ光学透明化方案（称为IsoScaleSQ）。实验包括离体和在体电生理学、组织学及透光率测量。
2：样本选择与数据来源：
使用ICR小鼠和Arc-dVenus转基因小鼠的脑切片。从海马和皮层区域制备不同厚度（100-900微米）的切片。
3：实验设备与材料清单：
设备包括振动切片机、共聚焦显微镜（FV1200；奥林巴斯）、脑矩阵（MBS-S0.5C；Brain Science Idea有限公司）和膜片钳系统。材料包括尿素、d-山梨醇、NaCl、Triton X-100、生物胞素、链霉亲和素-Alexa Fluor 594偶联物、Hoechst 33342、吖啶橙及溶液配制用各类化学试剂。
4：5C；Brain Science Idea有限公司）和膜片钳系统。材料包括尿素、d-山梨醇、NaCl、Triton X-生物胞素、链霉亲和素-Alexa Fluor 594偶联物、Hoechst 吖啶橙及溶液配制用各类化学试剂。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：将切片固定后，用含链霉亲和素偶联物的IsoScaleSQ溶液在37°C处理30-60分钟，并通过共聚焦显微镜成像。电生理记录在固定前进行。
5：数据分析方法：
统计分析包括配对t检验、Bonferroni校正的双因素方差分析及单因素方差分析，用于比较透光率、组织区域及树突曲折度。
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获取完整内容-
confocal microscope
FV1200
Olympus
Used for acquiring fluorescent images of cleared brain tissues to visualize neurons and subcellular structures.
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streptavidin-Alexa Fluor 594 conjugate
S11227
Thermo Fisher Scientific
Used for visualizing biocytin-filled neurons by binding to biocytin and emitting fluorescence for confocal microscopy.
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Hoechst 33342
H1399
Thermo Fisher Scientific
Used for nuclear staining to identify cell locations in brain tissues during fixation and clearing.
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acridine orange
A6014
Sigma-Aldrich
Used for nuclear staining to evaluate dye penetration in thick brain slices.
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brain matrix
MBS-S0.5C
Brain Science Idea Co., Ltd.
Used for coronally sectioning brain tissues at specific thicknesses (e.g., 500 μm) for histological processing.
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vibratome
Used for slicing brain tissues to specific thicknesses (e.g., 400 μm) for electrophysiology and histology.
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