研究目的
开发一种快速、单点法比色测定尿肌酐的方法，以替代Jaffé试验，使用3,5-二硝基苯甲酸和光电检测器以提高特异性并降低成本。
研究成果
尿液肌酐测定的DNBA法比单点Jaffé测定法更具特异性和准确性，且受葡萄糖、尿素等化合物的干扰更小。采用PEDD检测器可在不降低分析性能的前提下减少仪器成本。通过真实尿液样本验证显示其与参考方法具有良好的一致性，但由于干扰问题，该方法在血清中的应用受限。未来工作可聚焦于克服这些干扰以实现更广泛的临床应用。
研究不足
该方法对胆红素和蛋白质表现出较高的干扰性，可能限制其在尿液和透析液样本中的应用，而不适用于血清。反应产物随时间推移不稳定，需要精确控制反应时间。与Jaffé法相比，PEDD检测器的检测限（LOD）和定量限（LOQ）略高，但由于尿液中肌酐含量较高，这对尿液分析并非关键问题。
1：实验设计与方法选择：
本研究设计了一种在碱性条件下以3,5-二硝基苯甲酸（DNBA）为显色剂的比色法检测肌酐，并与Jaffé法进行比较?？⒘嘶谂涠苑⑸?检测二极管（PEDD）的低成本光电探测器。
2：样本选择与数据来源：
从华沙医科大学中央临床实验室获取已知肌酐水平的人尿样本，以Cobas 6000分析仪采用Jaffé方案分析作为参考。
3：实验设备与材料清单：
设备包括岛津UV-2401 PC分光光度计、一次性聚苯乙烯比色皿、不同厂商的LED、3D打印比色皿架、带L272运算放大器的可调实验室电源电路以及Keysight Technologies U1231A万用表。材料包括肌酐、3,5-二硝基苯甲酸、胆红素、牛血清白蛋白及Sigma Aldrich和Avantor Performance提供的其他分析级化学品。
4：实验流程与操作步骤：
通过测试不同NaOH浓度和体积比优化反应条件。针对PEDD测试了130对LED，根据电流和肌酐浓度测试选择最优配对。在反应开始后特定时间点进行测量。干扰研究涉及向肌酐溶液中添加潜在干扰物。真实样本分析包括稀释尿样并用分光光度法和PEDD测量。
5：数据分析方法：
使用校准曲线、线性范围、LOD、LOQ及统计检验（包括双尾配对学生t检验和Bland-Altman图）进行方法验证的数据分析。
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获取完整内容-
spectrophotometer
UV-2401 PC
Shimadzu
Used for conventional spectrophotometric measurements of absorbance in the creatinine assay.
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multimeter
U1231A
Keysight Technologies
Used to measure voltage generated by the LED-detector in the PEDD setup.
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clinical analyzer
Cobas 6000
Roche Diagnostics
Used as a reference method for creatinine determination in urine samples via Jaffé protocol.
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3D printer
Replicator 2X
Makerbot
Used to print the cuvette holder for the PEDD detector setup.
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operational amplifier
L272
Used in the adjustable laboratory power circuit to power the emitter diode with stabilized current.
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water purifying system
HLP5
Hydrolab
Used to purify water for all experiments to meet EU norms for instrumental analysis.
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LED
Various models (e.g., 510 nm, 0.75 cd; 600 nm, 2.2-4.2 cd)
Kingbright, Optosupply, Lucky Light, Seoul Semiconductor, Everlight Electronics
Used as emitters and detectors in the PEDD setup for light emission and detection in the creatinine assay.
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