研究目的
开发一种基于拉曼光谱的新型检测系统，用于测量涉及气态底物的酶促反应时间进程，特别应用于来自Desulfovibrio vulgaris Miyazaki F的[NiFe]氢化酶动力学研究，包括其H/D交换及其他反应。
研究成果
开发的拉曼光谱检测系统成功实现了对气态底物酶促反应的连续、无创监测，特别证实了H/D交换反应中H2与HD的同步生成。测得k/kout比值为1.9±0.2，表明反应速率与产物释放速率相当。该方法适用于其他以气体为底物的酶类检测，但需改进系统以提高检测精度。
研究不足
由于飞溅影响激光传输可能导致数据不准确，反应混合物无法进行剧烈搅拌。该系统采用的浓缩酶溶液活性低于预期，且底物浓度不足以满足某些动力学近似计算要求。该模型假设所有分子氢物质具有相同的动力学特性，但由于质量和动力学同位素效应，这一假设可能并不成立。
1：实验设计与方法选择：
本研究设计了一套基于拉曼光谱的检测系统，用于非侵入式连续监测反应比色皿中的气体组成，并采用动力学模型进行数据分析。
2：样本选择与数据来源：
使用来自脱硫弧菌Miyazaki F的[NiFe]氢化酶（在无氧条件下纯化）以及D2、HD和H2等气体。
3：HD和H2等气体。 实验设备与材料清单：
3. 实验设备与材料清单：包括定制的反应比色皿、
4：0 nm Nd:
5YVO4激光器、液氮冷却CCD探测器、光谱仪及多种气体。
5：实验步骤与操作流程：
在手套箱中无氧制备酶溶液，置于含D2气体的比色皿中，轻柔搅拌，保持30°C，并通过60秒曝光和累积测量随时间变化的拉曼光谱。
6：数据分析方法：
通过分析拉曼峰强度估算气体摩尔分数，利用动力学模型方程拟合时间进程数据以推导速率常数。
独家科研数据包，助您复现前沿成果，加速创新突破
获取完整内容-
Nd:YVO4 laser
Millennia X
Spectra-Physics
Excitation source for Raman spectroscopy with a power of 800 mW at the sample point.
立即获取同款设备 -
Spectrometer
Acton SpectraPro 300i
Princeton Instruments Inc.
30-cm spectrometer with a 500-nm blazed grating for analyzing Raman spectra.
暂无现货
预约到货通知
-
CCD detector
Spec-10:400B
Roper Scientific Inc.
Liquid-nitrogen-cooled detector for capturing Raman spectra.
暂无现货
预约到货通知
-
Glovebox
Coy Laboratory Products Inc.
Maintained under anoxic conditions for anaerobic sample preparation.
暂无现货
预约到货通知
-
H2 gas
Taiyo Nippon Sanso Corporation
Gaseous substrate for reactions, purchased with 99.99% purity.
暂无现货
预约到货通知
-
D2 gas
Cambridge Isotope Laboratories Inc.
Gaseous substrate for H/D exchange reactions, purchased with 99.8% purity.
暂无现货
预约到货通知
-
HD gas
Cambridge Isotope Laboratories Inc.
Gaseous product and intermediate in H/D exchange reactions, purchased with D:97% purity.
暂无现货
预约到货通知
-
登录查看剩余5件设备及参数对照表
查看全部
