研究目的
为克服现有炎症成像与癌症治疗纳米粒子的局限性(如组织穿透性有限、需外部辐照及生物相容性差),通过合成一种无需外部激发即可实现体内成像与治疗的生物可降解发光纳米粒子。
研究成果
CLP纳米粒子是一种用于炎症性疾病体内发光成像的有效纳米探针,也是一种无需外部激发即可进行癌症光动力治疗的安全纳米药物,能通过线粒体途径诱导细胞凋亡。改进策略包括增加鲁米诺和Ce6单元、放大局部活性氧并提高靶向效率。
研究不足
CLP纳米粒子的体内疗效未达预期,原因包括鲁米诺含量低导致生物发光共振能量转移效率低下、肿瘤微环境中活性氧水平不足以及静脉注射靶向效率有限。需进一步研究CLP蓄积组织的慢性毒性。
1:实验设计与方法选择:
本研究设计并合成了能进行生物发光共振能量转移(BRET)的CLP(Ce6-鲁米诺-PEG)偶联物,用于成像与治疗。方法包括化学合成、光谱表征及体内外测试。
2:样本选择与数据来源:
样本包含CLP偶联物、多种细胞系(如A549、B16F10、MCF-7、RAW264.7、MOVAS)及动物模型(腹膜炎、急性肝损伤、溃疡性结肠炎小鼠和A549异种移植模型)。数据通过实验室实验获取。
3:B16FMCF-RAWMOVAS)及动物模型(腹膜炎、急性肝损伤、溃疡性结肠炎小鼠和A549异种移植模型)。数据通过实验室实验获取。 实验设备与材料清单:
3. 实验设备与材料清单:设备包括透射电子显微镜(TEM)、紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计、IVIS Spectrum成像系统、共聚焦显微镜、流式细胞仪、HPLC系统和Western blot装置。材料包含Ce6、鲁米诺、PEG、H2O2、MPO、细胞培养试剂及动物模型。
4:鲁米诺、PEG、H2OMPO、细胞培养试剂及动物模型。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:CLP偶联物合成、特性表征、体外发光与细胞毒性测试、小鼠模型体内成像、抗肿瘤疗效研究及安全性评估。各检测项目均采用特定操作规程,包括孵育时间、剂量及成像参数等。
5:数据分析方法:
采用统计方法(如单因素方差分析、t检验)通过SPSS等软件分析数据,图像定量分析使用仪器配套软件完成。
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IVIS Spectrum imaging system
IVIS Spectrum
PerkinElmer
Used for luminescence and fluorescence imaging in vitro and in vivo to detect bioluminescent signals from samples.
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confocal microscope
LSM 800
Zeiss
Used for confocal laser scanning microscopy to observe cellular internalization and localization of nanoparticles.
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HPLC system
Prominence-i LC-2030C
Shimadzu
Used for high-performance liquid chromatography to quantify CLP concentrations in biological samples.
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fiber optic spectrometer
AvaSpec-HS
Avantes Inc.
Used to acquire luminescent curves in the presence of H2O2 and ClO?.
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flow cytometer
BD Accuri C6
Becton Dickinson
Used for flow cytometric analysis to measure intracellular ROS levels, cellular uptake, and apoptosis.
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ultraweak luminescence analyzer
BPCL-2-KGC
Used to quantify photon counts and time-dependent changes of luminescent signals under different conditions.
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microplate reader
EMax Plus Microplate Reader
Molecular Devices
Used for MTT assay to quantify cell viability.
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