研究目的
评估一种新型仿生聚谷氨酸苄酯（PBG）支架在培养iPSC来源的视网膜神经节细胞前体细胞中的作用，以促进其分化和神经突生长。
研究成果
PBG支架促进人诱导多能干细胞向视网膜谱系分化，形成类器官样结构，增强神经突生长，并缩短分化过程。该过程可能与谷氨酸信号通路相关，在疾病建模、药物筛选及临床应用方面具有潜力。
研究不足
研究使用了聚集的视网膜祖细胞，这使得难以获取纯RGC祖细胞进行分析，可能低估了统计学差异。该研究未涉及移植安全性或临床应用的最佳时机问题。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用改良的SFEB法将人诱导多能干细胞（hiPSC）分化为类视网膜神经节细胞（RGC-like），分别在PBG支架或盖玻片对照上培养，通过RNA测序和加权基因共表达网络分析（WGCNA）进行检测。
2：样本选择与数据来源：
使用Gibco?人游离型iPSC系来源的hiPSC，在饲养层上培养并分化。RNA测序数据与未分化的iPSC及GEO数据库中的成熟视网膜组织进行比较。
3：实验设备与材料清单：
设备包括相差显微镜、扫描电子显微镜（JEOL JSM-6700F）、实时PCR系统（Applied Biosystems 7500 Fast）、静电纺丝装置（注射泵、电源、金属收集器）及各类化学试剂和抗体。材料包括PBG支架、Matrigel、BDNF及免疫荧光抗体。
4：实验步骤与操作流程：
hiPSC解离后重聚集成RDM，转移至RMM，在PBG支架或盖玻片上贴壁培养并添加BDNF。在特定时间点收获细胞进行mRNA表达检测、免疫荧光、扫描电镜观察及RNA测序分析。
5：数据分析方法：
采用ΔΔCT法的实时PCR，ImageJ测量神经突长度，RNA测序数据通过ExAtlas和WGCNA分析，统计检验使用Mann-Whitney U检验、t检验和方差分析（ANOVA）。
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获取完整内容-
Scanning Electron Microscope
JSM-6700F
JEOL
Characterizing fibrous structure of electrospun scaffolds and cell morphology.
-
Real-Time PCR System
7500 Fast
Applied Biosystems
Performing real-time PCR for mRNA expression analysis.
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Fluorescence Microscope
IX71
Olympus
Observing immunofluorescence staining specimens.
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Syringe Pump
KDS-100
KD Scientific
Used in electrospinning apparatus for fabricating PBG scaffold.
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Gel Permeation Chromatography
Breeze
Waters
Determining weight average molecular weight of PBG.
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Illumina HiSeq 2000
HiSeq 2000
Illumina
Performing pair-end sequencing for RNA-seq analysis.
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