研究目的
通过使用荧光标记比较基因修饰与未修饰的人皮肤成纤维细胞的运动,研究转导过程对细胞形态及细胞行为的影响。
研究成果
转导过程改变了人皮肤成纤维细胞在爬行过程中所覆盖的体积和区域,导致运动特性发生改变,例如由于形态变化而使移动距离和区域穿透效率降低。转导细胞的极化程度降低并形成额外的伪足,在EGFP和DsRed2组之间观察到差异。总体运动行为保持不变,但需要进一步实验来探究潜在原因,如细胞骨架刚度和粘附性。
研究不足
该研究受限于图像分割的挑战,部分序列仅部分正确或不得不被舍弃。对运动和形态的关注可能无法捕捉增殖或死亡等其他行为,而使用低对比度且存在伪影的明场图像可能影响准确性。未来工作可采用共聚焦显微镜估算Z轴细胞尺寸,并探究细胞骨架刚度与粘附性的变化。
1:实验设计与方法选择:
本研究培养并监测了三组人皮肤成纤维细胞(对照组、EGFP转导组、DsRed2转导组),采用图像处理方法分析其运动与形态,具体使用改进的水平集法进行分割及运动描述符和形态特征的量化。
2:样本选择与数据来源:
成纤维细胞取自人体皮肤,通过慢病毒载体稳定转导EGFP或DsRed2后,在标准培养基中培养。利用显微镜从24孔板的多个孔中采集图像序列。
3:实验设备与材料清单:
设备包括配备温控及CO?培养舱BL-X的Leica显微镜LAS AF DMI 6000B、单色相机DMI 6000B、40倍明场物镜(HCPL APO 1.25)、Nest生物技术公司生产的玻璃底24孔板,以及BD FACSCanto II流式细胞仪。材料包含高糖DMEM培养基、胎牛血清、非必需氨基酸、慢病毒载体及荧光标记物。
4:0B、单色相机DMI 6000B、40倍明场物镜(HCPL APO 25)、Nest生物技术公司生产的玻璃底24孔板,以及BD FACSCanto II流式细胞仪。材料包含高糖DMEM培养基、胎牛血清、非必需氨基酸、慢病毒载体及荧光标记物。
实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:细胞接种静置后,通过显微镜以1或2分钟间隔采集长达4小时的明场与荧光图像序列。采用水平集法分割图像并量化运动与形态特征,流式细胞术用于分析细胞体积。
5:数据分析方法:
通过t检验评估统计显著性,运动描述符与形态特征的计算使用Matlab和Excel完成。
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